喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌的体外抑菌研究
：嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是一种能够引起多种淡水养殖鱼类败血症的重要致病菌，在自然界中广泛分布，给水产养殖业造成了较严重的经济损失。多种抗生素能够抑杀该菌，尤其是氟喹诺酮类药物在这类病害的防治过程中发挥了不可替代的作用。为评估嗜水气单胞菌对喹诺酮类药物恩诺沙星的敏感性，试验采用微量肉汤稀释法测定26株流行菌株的最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC），并用PCR方法检测相关耐药基因gyrA与parC。结果显示，26株嗜水气单胞菌中，有11株耐药，耐药率为42.3%。PCR结果显示，有17株菌株含有gyrA基因，有21株菌株含有parC基因。试验为嗜水气单胞菌临床用药和耐药机制的研究提供依据。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1菌株 2
1.2试剂及仪器 2
1.2.1试剂2
1.2.2 试验仪器 2
1.3测定MIC 3
1.3.1 培养基制备3
1.3.2 MIC板制备3
1.3.3 接种物制备3
1.3.4 结果判断3
1.4检测耐药基因3
1.4.1合成耐药基因引物3
1.4.2菌株DNA模版制备3
1.4.3 PCR法检测耐药基因3
2结果与分析4
2.1 细菌MIC测定 4
2.2 耐药基因检测4
3 讨论5
致谢6
参考文献6
喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌的体外抑菌研究
引言
嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）隶属于气单胞菌科（Aeromonadaceae）气单胞属（Aeromonas），是一类革兰阴性短杆菌。该菌是一种条件致病菌，在自然界中分布广泛，常见于淡水、污水、淤泥、土壤和粪便中，对水产动物、畜禽和人类都有致病性，是一种典型的人兽鱼共患病原菌[1]，可引起多种水产动物的败血症和人
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
类的腹泻，给我国养殖业造成巨大的经济损失和社会公共卫生隐患[2]。直到现在，由该菌引起的各类水产病层出不穷，引起社会各界的高度关注。多种抗生素能够抑制杀死该菌，尤其是喹诺酮类药物，可以通过双重抗菌作用实现溶解、抑杀细菌的目的[3]。但由于目前抗生素滥用的现象普遍存在，嗜水气单胞菌的耐药性问题越发严重，部分菌株产生了多重耐药性，使得相关疾病防治工作日趋困难，使得水产动物源性食品的质量安全受到严重威胁。
恩诺沙星是一种氟喹诺酮类药（Ftuoroquinolones），具有抗菌谱广、杀菌活性强、体内分布广、抗菌作用独特、生物利用度高、毒副作用小、无交叉耐药性等特点，在水生动物病原体的药效和体内药动学研究中都展示出诸多优越性。目前，恩诺沙星已广泛应用于兽医临床上，国外很多学者研究了恩诺沙星的药效学，结果都表明恩诺沙星在水生动物常见细菌性疾病治疗中表现较好的抗菌活性。Martinsen等[4]报道了在4 °C和15 °C时恶喹酸、氟甲喹、恩诺沙星和土霉素对鱼类常见病原菌的体外抗菌效果，结果显示药物在4°C的抗菌活性低于15°C的抗菌活性，并且在以上药物中恩诺沙星的抗菌活性最强。Bowser等[5]报道，恩诺沙星是一种具有较好临床疗效的抗菌药物，对于鱼类细菌感染的疾病效果显著，并且与其他类抗生素相比不易产生耐药性。大量的研究结果已经证实，恩诺沙星具有高度的抗菌活性，几乎对水生动物所有的病原菌都有较强的抗菌作用，如嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、弧菌、链球菌、巴氏杆菌、爱德华氏菌等 [6]。细菌对氟喹诺酮类药物耐药性的产生机制已有很多研究，大部分研究都表明，细菌靶位酶的改变能够直接影响到药物与其结合的亲和力从而产生不同程度的耐药性。氟喹诺酮类药物的作用靶位是两种异源四聚体，分别为DNA旋转酶和拓扑异构酶IV，它们分别由两对不同的亚单位组成。其中DNA旋转酶由2个GyrA亚基和2个GyrB亚基组成，拓扑异构酶IV由2个ParC亚基和2个ParE亚基组成[7]。Lee等[8]认为革兰氏阴性菌靶位酶的改变主要发生在GyrA和ParC亚单位的喹诺酮抗性决定区。
抗生素最小抑菌浓度（MIC）测定对于确保细菌感染的疗效方面具有重要意义。聚合酶链式反应（PCR）检测方法具有特异性强，灵敏度高的特点，其设计的引物可以长期保存使用，适于大量样品特定基因的检测。因此根据NCCLS标准，本试验采用微量肉汤稀释法[9]测定恩诺沙星对嗜水气单胞菌流行菌株的MIC，采用PCR方法对gyrA和parC耐药基因进行检测，为更加合理应用恩诺沙星防治嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病提供一定的依据。
1 材料与方法
菌株
试验所用的26株嗜水气单胞菌菌株均为大学动物医学院微生物实验室分离、纯化、鉴定并进行了多位点序列分型。26株菌株来源于江苏省、河南省和浙江省，其中有24株分离自淡水鱼类，有2株分离自发病水域。菌株于5%脱脂奶中80°C保存备用。供试26株菌株的来源、编号等见表1。
表1 供试菌株来源与编号
菌株
来源
地理来源
分离时间
J1
Diseased crucian carp
Jiangsu,China
1989
NJ1
Healthy crucian carp
Jiangsu,China
2008
CS34
Healthy crucian carp
Jiangsu,China
2010
CS43
Diseased silver carp
Jiangsu,China
2010
JH17
Healthy Chinese bream
Jiangsu,China
2010
JH19
Healthy Chinese bream
Jiangsu,China
2010
NJ28
Diseased crucian carp
Jiangsu,China
2010
NJ3
Water
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1菌株 2
1.2试剂及仪器 2
1.2.1试剂2
1.2.2 试验仪器 2
1.3测定MIC 3
1.3.1 培养基制备3
1.3.2 MIC板制备3
1.3.3 接种物制备3
1.3.4 结果判断3
1.4检测耐药基因3
1.4.1合成耐药基因引物3
1.4.2菌株DNA模版制备3
1.4.3 PCR法检测耐药基因3
2结果与分析4
2.1 细菌MIC测定 4
2.2 耐药基因检测4
3 讨论5
致谢6
参考文献6
喹诺酮类药物对嗜水气单胞菌的体外抑菌研究
引言
嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）隶属于气单胞菌科（Aeromonadaceae）气单胞属（Aeromonas），是一类革兰阴性短杆菌。该菌是一种条件致病菌，在自然界中分布广泛，常见于淡水、污水、淤泥、土壤和粪便中，对水产动物、畜禽和人类都有致病性，是一种典型的人兽鱼共患病原菌[1]，可引起多种水产动物的败血症和人
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
类的腹泻，给我国养殖业造成巨大的经济损失和社会公共卫生隐患[2]。直到现在，由该菌引起的各类水产病层出不穷，引起社会各界的高度关注。多种抗生素能够抑制杀死该菌，尤其是喹诺酮类药物，可以通过双重抗菌作用实现溶解、抑杀细菌的目的[3]。但由于目前抗生素滥用的现象普遍存在，嗜水气单胞菌的耐药性问题越发严重，部分菌株产生了多重耐药性，使得相关疾病防治工作日趋困难，使得水产动物源性食品的质量安全受到严重威胁。
恩诺沙星是一种氟喹诺酮类药（Ftuoroquinolones），具有抗菌谱广、杀菌活性强、体内分布广、抗菌作用独特、生物利用度高、毒副作用小、无交叉耐药性等特点，在水生动物病原体的药效和体内药动学研究中都展示出诸多优越性。目前，恩诺沙星已广泛应用于兽医临床上，国外很多学者研究了恩诺沙星的药效学，结果都表明恩诺沙星在水生动物常见细菌性疾病治疗中表现较好的抗菌活性。Martinsen等[4]报道了在4 °C和15 °C时恶喹酸、氟甲喹、恩诺沙星和土霉素对鱼类常见病原菌的体外抗菌效果，结果显示药物在4°C的抗菌活性低于15°C的抗菌活性，并且在以上药物中恩诺沙星的抗菌活性最强。Bowser等[5]报道，恩诺沙星是一种具有较好临床疗效的抗菌药物，对于鱼类细菌感染的疾病效果显著，并且与其他类抗生素相比不易产生耐药性。大量的研究结果已经证实，恩诺沙星具有高度的抗菌活性，几乎对水生动物所有的病原菌都有较强的抗菌作用，如嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、弧菌、链球菌、巴氏杆菌、爱德华氏菌等 [6]。细菌对氟喹诺酮类药物耐药性的产生机制已有很多研究，大部分研究都表明，细菌靶位酶的改变能够直接影响到药物与其结合的亲和力从而产生不同程度的耐药性。氟喹诺酮类药物的作用靶位是两种异源四聚体，分别为DNA旋转酶和拓扑异构酶IV，它们分别由两对不同的亚单位组成。其中DNA旋转酶由2个GyrA亚基和2个GyrB亚基组成，拓扑异构酶IV由2个ParC亚基和2个ParE亚基组成[7]。Lee等[8]认为革兰氏阴性菌靶位酶的改变主要发生在GyrA和ParC亚单位的喹诺酮抗性决定区。
抗生素最小抑菌浓度（MIC）测定对于确保细菌感染的疗效方面具有重要意义。聚合酶链式反应（PCR）检测方法具有特异性强，灵敏度高的特点，其设计的引物可以长期保存使用，适于大量样品特定基因的检测。因此根据NCCLS标准，本试验采用微量肉汤稀释法[9]测定恩诺沙星对嗜水气单胞菌流行菌株的MIC，采用PCR方法对gyrA和parC耐药基因进行检测，为更加合理应用恩诺沙星防治嗜水气单胞菌引起的水生动物疾病提供一定的依据。
1 材料与方法
菌株
试验所用的26株嗜水气单胞菌菌株均为大学动物医学院微生物实验室分离、纯化、鉴定并进行了多位点序列分型。26株菌株来源于江苏省、河南省和浙江省，其中有24株分离自淡水鱼类，有2株分离自发病水域。菌株于5%脱脂奶中80°C保存备用。供试26株菌株的来源、编号等见表1。
表1 供试菌株来源与编号
菌株
来源
地理来源
分离时间
J1
Diseased crucian carp
Jiangsu,China
1989
NJ1
Healthy crucian carp
Jiangsu,China
2008
CS34
Healthy crucian carp
Jiangsu,China
2010
CS43
Diseased silver carp
Jiangsu,China
2010
JH17
Healthy Chinese bream
Jiangsu,China
2010
JH19
Healthy Chinese bream
Jiangsu,China
2010
NJ28
Diseased crucian carp
Jiangsu,China
2010
NJ3
Water
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/829.html
