h9n2亚型禽流感病毒nj01株全基因序列分析及保真片段的克隆
禽流感病毒（AIVs）变异极快，亚型众多，在防控上存在极大困难，所以目前应加强AIVs在致病机理、跨宿主传播等机制方面的研究，加快新型禽流感疫苗的研制和抗流感药物的开发。目前，反向遗传学技术已被广泛用于AIVs复制机制和致病机理的研究。本研究对H9N2 AIVs NJ01株的全基因组进行了序列测定和遗传进化分析，并对其8个因片段（PB2、PB1、PA、HA、NA、NP、NS、M）进行了保真克隆。遗传进化分析结果显示，NJ01病毒的PB2、PB1、PA、HA、NA、NP、M基因均处于A/chicken/Shanghai/F/98-like分支，而NS基因处于A/Duck/HongKong/Y439/97-like分支。；基因克隆和测序结果显示，我们获得了NJ01病毒8个基因片段的保真克隆。以上结果为H9N2 AIVs反向遗传操作系统的建立奠定了实验基础。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1材料与方法3
1.1材料 3
1.1.1 毒株、载体及菌种3
1.1.2 主要试剂3
1.1.3 常用培养基和缓冲液3
1.1.4 主要仪器3
1.2方法 3
1.2.1引物设计与合成3
1.2.2 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株病毒的复壮与增殖4
1.2.3 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株RNA的提取及cDNA的获取5
1.2.4目的片段的扩增与纯化5
1.2.5重组质粒的构建和筛选6
1.2.6 重组质粒的鉴定6
1.2.7 基因序列分析7
2结果与分析7
2.1 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株病毒血凝价测定结果7
2.2目的基因RTPCR扩增结果7
2.3蓝白斑筛选及菌液PCR鉴定结果7
2.4重组阳性质粒测序鉴定结果 9
2.5目的基因序列分析9
2.5.1 HA基因分析9
2.5.2 NA基因分析10
2.5.3 PA、PB1、P *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
B2基因分析 11
2.5.4 NS、NP、M基因分析13
3讨论 15
致谢16
参考文献16
H9N2亚型禽流感病毒NJ01株全基因序列分析及保真片段克隆
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1材料与方法3
1.1材料 3
1.1.1 毒株、载体及菌种3
1.1.2 主要试剂3
1.1.3 常用培养基和缓冲液3
1.1.4 主要仪器3
1.2方法 3
1.2.1引物设计与合成3
1.2.2 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株病毒的复壮与增殖4
1.2.3 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株RNA的提取及cDNA的获取5
1.2.4目的片段的扩增与纯化5
1.2.5重组质粒的构建和筛选6
1.2.6 重组质粒的鉴定6
1.2.7 基因序列分析7
2结果与分析7
2.1 H9N2亚型禽流感病毒NJ01株病毒血凝价测定结果7
2.2目的基因RTPCR扩增结果7
2.3蓝白斑筛选及菌液PCR鉴定结果7
2.4重组阳性质粒测序鉴定结果 9
2.5目的基因序列分析9
2.5.1 HA基因分析9
2.5.2 NA基因分析10
2.5.3 PA、PB1、P *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
B2基因分析 11
2.5.4 NS、NP、M基因分析13
3讨论 15
致谢16
参考文献16
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