casr介导色氨酸诱导猪胃胃肠激素分泌的规律
[目的]通过测定不同条件下灌流实验中胃窦胃泌素和生长抑素的分泌量，研究色氨酸对猪胃肠道胃肠激素分泌活性的影响。[方法]取猪胃底、胃窦组织进行三种不同处理的灌流实验，实验一变量为灌流液中色氨酸浓度，实验二变量为CaSR激活剂，实验三变量为色氨酸以及CaSR抑制剂的有无。[结果]实验中添加了色氨酸后，胃肠激素浓度较对照组具有显著差异(P < 0.05)。当添加CaSR激活剂后，胃肠激素浓度较对照组具有显著差异(P < 0.05)。当添加CaSR抑制剂后，胃肠激素浓度较对照组并无显著差异(P > 0.05)。[结论] 色氨酸可以促进胃肠激素生长抑素、胃泌素分泌活性，这种促分泌作用通过CaSR介导实现的。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Keywords1
引言1
1材料与方法2
1.1建立表面灌流系统2
1.2试剂和仪器2
1.3样品处理3
1.3.1配置Kreb’s培养液3
1.3.2组织处理3
1.4试验设计与样品收集3
1.4.1灌流实验3
1.4.2试验处理3
1.5指标测定方法3
1.6数据统计分析3
2结果与分析3
2.1 Trp对猪胃生长抑素、胃泌素分泌活性的影响3
2.2 CaSR激活剂处理猪胃生长抑素、胃泌素分泌活性的影响4
2.3 CaSR抑制剂处理对Trp诱导生长抑素、胃泌素分泌活性的影响4
3讨论5
4结论5
致谢6
参考文献6
CaSR介导色氨酸诱导猪胃胃肠激素分泌的规律
引言
胃肠道除除具有消化吸收功能外，也执行着重要的内分泌功能。胃肠道内分泌细胞有A、B、D、H、G、I、K、L、N、P、S、EC等[1]，这些细胞在受到某些物质的刺激之后，可以分泌出许多代谢相关的激素，统称为胃肠激素。其中常见的有生长抑素（SS，由D细胞分泌）、胰高血糖素样肽（GLPs，由L细胞分泌）、胆囊收缩素(CCK，由I细胞分泌)、胃泌素(gastrin，G细胞分泌)等。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
胃泌素(gastrin)是人类最先发现的激素之一，1905年首先被伦敦大学的Edlkins发现并命名，后来证明其属于多肽，是胃泌素族的重要成员[2]。胃泌素主要是由胃窦和小肠的上部粘膜G细胞释放。刺激胃酸分泌是胃泌素的主要功能。生长抑素(SS)是一种抑制脑垂体分泌生长激素的神经调节肽，广泛分布于脊椎动物的中枢和外周神经系统、胃肠道等组织，SS 的主要功能包括抑制细胞增殖、神经递质释放、抑制胃酸、胃泌素及胃蛋白酶的分泌和刺激黏液分泌等[3]。
色氨酸(Trp)不仅是人体必需氨基酸之一，也是猪的第四限制性必需氨基酸，国内外学者对其都有大量研究，发现色氨酸及其代谢产物5羟色胺与动物采食量、免疫、抗应激等生理反应密切相关[4]。
钙(Ca)是机体内最重要的矿物元素之一，在各项生理活动中都处于必不可缺的地位，参与一切生命活动，例如维系细胞的正常生理功能，维持细胞膜两侧生物电位正常，维持神经及神经肌肉传导功能和正常的肌肉伸缩与舒张功能。自Brown等[5]首次于牛甲状旁腺细胞中克隆出钙敏感受体（CaSR）后，在人的甲状旁腺和大鼠肾脏中也发现了CaSR的表达[68]， CaSR能被激活后，能够启动与其有关的信号通路，进一步调控细胞的增殖与分化和多种激素的分泌。
目前关于氨基酸和蛋白质对肠胃中CaSR的表达及影响方面的研究在家畜和其他动物上还比较少，对机体各项生命活动的调控作用也尚不明确。为此，本课题设计不同浓度色氨酸，通过不同条件的体外灌流实验，测定胃窦生长抑素、胃泌素分泌活性，揭示CaSR介导色氨酸诱导猪胃窦胃肠激素SS、gastrin分泌的规律 为后继续研究CaSR调节动物生理活动相关的机制及其发挥的生理功能奠定理论基础。
1 材料与方法
建立表面灌流系统
表面灌流装置参照谈寅飞[9]等人的方法并加以改进而成（如图11），该系统包括氧气瓶、储液瓶、恒流泵、灌流小室、恒温水浴锅、收集器、烧杯和硅胶管8个部分。 灌流小室（如图12）是由5mL的一次性注射器改装而成，包括尼龙网（400目）、针头、橡胶塞和注射器4个部分。
图11：灌流系统 Superfusion system
1.氧气瓶 Oxygen pump; 2. 储液瓶Media reservoir; 3.恒流泵 Peristaltic pump; 4.灌流小室 Chamber;
5.玻璃管 Glass tube; 6.水浴锅 Water bath; 7.收集器 Collector. 8.硅胶管Silicone tube
图12：灌流小室 Chamber
尼龙网（400目）Nylon filter platform 2. 针头Needle3. 橡胶塞 Rubber stoper 4. 注射器Syringe
1．2 试剂和仪器
Kreb’s 培养液；色氨酸（Trp）、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）购自SigmaAldrich（中国，上海）； cinacalcet和NPS2143均购自MedChem Express（中国，上海）；猪生长抑素SS（ANGE31118P，AOGENE）、胃泌素gastrin（ANGE31183P，AOGENE）ELISA试剂盒购自南京奥青生物技术有限公司（中国，南京）；
pH计；酶标仪（Thermo，USA）；低温高速离心机（Eppendorf，Germany）。
1．3 样品处理
1．3．1 配置Kreb’s培养液 Kreb’s培养液(136.87 mM NaCl，4.02 mM KCl，2.10mM MgCl2，1.80 mM CaCl2，25.18mM HEPES，pH = 7.2）使用去离子水配置然后进行高压灭菌。各项试验均使用Kreb’s培养液作为基础液进行处理用作灌流液，分别按试验设计安排进行配制；对照组均使用Kreb’s培养液作为灌流液。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Keywords1
引言1
1材料与方法2
1.1建立表面灌流系统2
1.2试剂和仪器2
1.3样品处理3
1.3.1配置Kreb’s培养液3
1.3.2组织处理3
1.4试验设计与样品收集3
1.4.1灌流实验3
1.4.2试验处理3
1.5指标测定方法3
1.6数据统计分析3
2结果与分析3
2.1 Trp对猪胃生长抑素、胃泌素分泌活性的影响3
2.2 CaSR激活剂处理猪胃生长抑素、胃泌素分泌活性的影响4
2.3 CaSR抑制剂处理对Trp诱导生长抑素、胃泌素分泌活性的影响4
3讨论5
4结论5
致谢6
参考文献6
CaSR介导色氨酸诱导猪胃胃肠激素分泌的规律
引言
胃肠道除除具有消化吸收功能外，也执行着重要的内分泌功能。胃肠道内分泌细胞有A、B、D、H、G、I、K、L、N、P、S、EC等[1]，这些细胞在受到某些物质的刺激之后，可以分泌出许多代谢相关的激素，统称为胃肠激素。其中常见的有生长抑素（SS，由D细胞分泌）、胰高血糖素样肽（GLPs，由L细胞分泌）、胆囊收缩素(CCK，由I细胞分泌)、胃泌素(gastrin，G细胞分泌)等。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
胃泌素(gastrin)是人类最先发现的激素之一，1905年首先被伦敦大学的Edlkins发现并命名，后来证明其属于多肽，是胃泌素族的重要成员[2]。胃泌素主要是由胃窦和小肠的上部粘膜G细胞释放。刺激胃酸分泌是胃泌素的主要功能。生长抑素(SS)是一种抑制脑垂体分泌生长激素的神经调节肽，广泛分布于脊椎动物的中枢和外周神经系统、胃肠道等组织，SS 的主要功能包括抑制细胞增殖、神经递质释放、抑制胃酸、胃泌素及胃蛋白酶的分泌和刺激黏液分泌等[3]。
色氨酸(Trp)不仅是人体必需氨基酸之一，也是猪的第四限制性必需氨基酸，国内外学者对其都有大量研究，发现色氨酸及其代谢产物5羟色胺与动物采食量、免疫、抗应激等生理反应密切相关[4]。
钙(Ca)是机体内最重要的矿物元素之一，在各项生理活动中都处于必不可缺的地位，参与一切生命活动，例如维系细胞的正常生理功能，维持细胞膜两侧生物电位正常，维持神经及神经肌肉传导功能和正常的肌肉伸缩与舒张功能。自Brown等[5]首次于牛甲状旁腺细胞中克隆出钙敏感受体（CaSR）后，在人的甲状旁腺和大鼠肾脏中也发现了CaSR的表达[68]， CaSR能被激活后，能够启动与其有关的信号通路，进一步调控细胞的增殖与分化和多种激素的分泌。
目前关于氨基酸和蛋白质对肠胃中CaSR的表达及影响方面的研究在家畜和其他动物上还比较少，对机体各项生命活动的调控作用也尚不明确。为此，本课题设计不同浓度色氨酸，通过不同条件的体外灌流实验，测定胃窦生长抑素、胃泌素分泌活性，揭示CaSR介导色氨酸诱导猪胃窦胃肠激素SS、gastrin分泌的规律 为后继续研究CaSR调节动物生理活动相关的机制及其发挥的生理功能奠定理论基础。
1 材料与方法
建立表面灌流系统
表面灌流装置参照谈寅飞[9]等人的方法并加以改进而成（如图11），该系统包括氧气瓶、储液瓶、恒流泵、灌流小室、恒温水浴锅、收集器、烧杯和硅胶管8个部分。 灌流小室（如图12）是由5mL的一次性注射器改装而成，包括尼龙网（400目）、针头、橡胶塞和注射器4个部分。
图11：灌流系统 Superfusion system
1.氧气瓶 Oxygen pump; 2. 储液瓶Media reservoir; 3.恒流泵 Peristaltic pump; 4.灌流小室 Chamber;
5.玻璃管 Glass tube; 6.水浴锅 Water bath; 7.收集器 Collector. 8.硅胶管Silicone tube
图12：灌流小室 Chamber
尼龙网（400目）Nylon filter platform 2. 针头Needle3. 橡胶塞 Rubber stoper 4. 注射器Syringe
1．2 试剂和仪器
Kreb’s 培养液；色氨酸（Trp）、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）购自SigmaAldrich（中国，上海）； cinacalcet和NPS2143均购自MedChem Express（中国，上海）；猪生长抑素SS（ANGE31118P，AOGENE）、胃泌素gastrin（ANGE31183P，AOGENE）ELISA试剂盒购自南京奥青生物技术有限公司（中国，南京）；
pH计；酶标仪（Thermo，USA）；低温高速离心机（Eppendorf，Germany）。
1．3 样品处理
1．3．1 配置Kreb’s培养液 Kreb’s培养液(136.87 mM NaCl，4.02 mM KCl，2.10mM MgCl2，1.80 mM CaCl2，25.18mM HEPES，pH = 7.2）使用去离子水配置然后进行高压灭菌。各项试验均使用Kreb’s培养液作为基础液进行处理用作灌流液，分别按试验设计安排进行配制；对照组均使用Kreb’s培养液作为灌流液。
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