猪源oasl抗日本脑炎病毒活性的研究
2-5 寡腺苷合成酶(2-5-oligoadenylate synthetases, OAS)是一种干扰素（Interferon，IFN）诱导的抗病毒蛋白，是哺乳动物先天性免疫系统的重要成分。本研究发现猪肾细胞PK-15经IFN-β处理后不仅产生完整的pOASL，还产生缺失外显子4的pOASL（pOASL-D4）。构建pOASL不同剪接体的真核表达载体，分别命名为pFlag-OASL1和pFlag-OASL-D4。通过瞬时转染PK-15细胞、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹检测不同OASL剪接体抗日本脑炎病毒的活性。qRT-PCR结果显示，相比于对照组，pOASL1瞬时表达细胞中病毒基因组拷贝数降低 56.78 ％、pOASL-D4组细胞中病毒基因组拷贝数降低80.01％。Western Blotting结果显示，在PK15细胞中转染相同剂量的质粒（500ng/孔），pOASL1的表达量高于pOASL-D4，pFlag-OASL1组和pFlag-OASL-D4组JEV E蛋白表达均低于转染空载组，pFlag-OASL-D4组E蛋白低于pFlag-OASL1。这些结果表明pOASL-D4抗病毒活性强于pOASL1。该研究结果为进一步探讨pOASL的抗病毒机制提供了参考。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1实验材料2
1.1细胞和毒株2
1.2 细菌菌株和载体2
1.3 主要试剂2
1.4 主要仪器3
2 实验方法 3
2.1 猪源OASL不同剪接体的发现及真核表达载体的构建3
2.1.1 PK15细胞总RNA提取 3
2.1.2 PK15细胞总RNA的反转录3
2.1.3 PCR扩增猪源OASL目的基因4
2.1.4 OASL PCR产物的回收纯化4
2.1.5猪源OASL和Flag7.1载体的质粒的双酶切4
2.1.6 双酶切产物的回收纯化与连接5
2.1.7 大肠杆菌DH5α感受态 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
的制备 5
2.1.8 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞5
2.1.9 重组质粒的菌液PCR鉴定 5
2.1.10 去内毒素提取重组质粒 5
2.1.11 重组质粒的双酶切鉴定 6
2.1.12 重组质粒基因测序 6
2.2 qRT PCR检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白的抗JEV活性 6
2.2.1 PK15细胞转染 FlagOASL 和 FlagOASLD4 6
2.2.2 PK15细胞感染JEV病毒 6
2.2.3 PK15细胞总RNA的提取 6
2.2.4 PK15细胞总RNA的反转录 6
2.2.5 qRTPCR检测JEV 基因组相对变化量 7
2.3 Western Bloting检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白抗JEV活性 7
3 结果与分析 8
3.1猪源OASL存在2个不同的剪接体
3.2重组猪源OASL不同剪接体真核表达质粒的鉴定 8
3.3 qRT PCR检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白的抗JEV活性 9
3.4 Western Blot检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白抗JEV活性10
4 讨论 10
致谢11
参考文献12
猪源OASL抗日本脑炎病毒活性的研究
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关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1实验材料2
1.1细胞和毒株2
1.2 细菌菌株和载体2
1.3 主要试剂2
1.4 主要仪器3
2 实验方法 3
2.1 猪源OASL不同剪接体的发现及真核表达载体的构建3
2.1.1 PK15细胞总RNA提取 3
2.1.2 PK15细胞总RNA的反转录3
2.1.3 PCR扩增猪源OASL目的基因4
2.1.4 OASL PCR产物的回收纯化4
2.1.5猪源OASL和Flag7.1载体的质粒的双酶切4
2.1.6 双酶切产物的回收纯化与连接5
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2.1.8 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞5
2.1.9 重组质粒的菌液PCR鉴定 5
2.1.10 去内毒素提取重组质粒 5
2.1.11 重组质粒的双酶切鉴定 6
2.1.12 重组质粒基因测序 6
2.2 qRT PCR检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白的抗JEV活性 6
2.2.1 PK15细胞转染 FlagOASL 和 FlagOASLD4 6
2.2.2 PK15细胞感染JEV病毒 6
2.2.3 PK15细胞总RNA的提取 6
2.2.4 PK15细胞总RNA的反转录 6
2.2.5 qRTPCR检测JEV 基因组相对变化量 7
2.3 Western Bloting检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白抗JEV活性 7
3 结果与分析 8
3.1猪源OASL存在2个不同的剪接体
3.2重组猪源OASL不同剪接体真核表达质粒的鉴定 8
3.3 qRT PCR检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白的抗JEV活性 9
3.4 Western Blot检测PK15细胞瞬时表达OASL蛋白抗JEV活性10
4 讨论 10
致谢11
参考文献12
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