猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxiapxiiapxiiiomp2的基因克隆及原核表达

猪传染性胸膜肺炎是中大猪群的一种常见猪病，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了开发高效和具有交叉保护力的猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗，将编码APP的主要毒力因子—其溶血外毒素的ApxI、ApxII、ApxIII基因以及外膜蛋白的Omp2基因通过PCR扩增后分别克隆到原核表达载体pCold I中，构建重组质粒，并于Rosetta或含有伴侣蛋白质粒pG-KJE8的BL21商品化菌株中进行蛋白表达。通过不断调整实验条件，4种重组蛋白在大肠杆菌中均能成功表达。SDS-PAGE检测结果显示，4种蛋白大小正确，条带清晰，部分实现了可溶性表达，表达量也较为可观。该研究的成功开展为后续开发一种高效的猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗提供了参考。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1细菌菌株4
1.1.2载体与质粒4
1.1.3主要药品与试剂4
1.1.4引物4
1.2方法 5
1.2.1细菌的活化5
1.2.2 APP基因组DNA的提取5
1.2.3原核表达载体的构建5
1.2.3.1 ApxI、ApxII、ApxIII、Omp2片段的扩增5
1.2.3.2 PCR产物的电泳测定、回收与纯化5
1.2.3.3 PCR产物的克隆5
1.2.3.4克隆载体的转化6
1.2.3.5克隆载体的酶切鉴定6
1.2.3.6 ApxI、ApxII、ApxIII、Omp2的测序6
1.2.3.7重组表达质粒的构建、筛选与鉴定6
1.2.4原核表达7
1.2.4.1诱导表达7
1.2.4.2表达产物的SDSPAGE检测7
2结果7
2.1原核表达载体的构建7
2.1.1 ApxI、ApxII、ApxIII、Omp2片段的扩增8
2.1.2克隆载体的酶切鉴定8
2.1.3 ApxI、ApxII、ApxIII、O *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072* 
mp2的测序10
2.1.4重组表达质粒的构建、筛选与鉴定10
2.2原核表达12
2.2.1诱导表达12
2.2.2表达产物的SDSPAGE可溶性检测14
3讨论16
3.1 ApxI、ApxII、ApxIII、Omp2作为研究对象的原因17
3.2 关于基因片段与克隆载体的连接转化18
3.3关于pCold IApxI、pCold IApxII、pCold IApxIII、pCold IOmp2的蛋白表达18
3.4关于SDSPAGE电泳检测18
4.结论18
4. 1 18
4. 2 19
致谢19
参考文献 20
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxI、ApxII、ApxIII、Omp2 的基因克隆及原核表达

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