蛋鸡场三例散发性眼部肿物的诊断与治疗
蛋鸡场三例散发性眼部肿物的诊断与治疗[20200507184402]
摘要：引起鸡产生眼部肿物的原因主要有鸡马立克氏病、鸡痘、网状内皮增生症、细菌感染及外伤等，与养殖环境有密不可分的关系。本文通过对句容市科兴畜禽养殖基地三例蛋鸡眼部肿物的诊断与治疗，总结分析了此三个病例的发病情况、病理解剖、病原分子检测、病原鸡胚接种和治疗，得出结论为：该三例眼部肿物疾病为外科感染,可用抗生素治愈。可为蛋鸡养殖场提供参考资料。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
关键字:眼部肿物；蛋鸡；感染；诊断；治疗
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Keywords3
引言（或绪论）3
1材料与方法3
1.1材料3
1.1.1动物3
1.1.2实验3
1.2临床检查4
1.3剖检4
1．4 马立克氏病分子生物学诊断4
1.4.1引物的设计4
1.4.2从组织样品中提取DNA5
1.4.3测定DNA的浓度5
1.4.4 PCR扩增5
1.5病料鸡胚接种5
1．6用药 6
2 结果与分析 6
2．1剖检结果 6
2．2分子生物学诊断结果 6
2．3鸡胚接种结果 7
2．4小结 7
3讨论 7
3．1引起眼部肿物的病原 7
3．2本病的危害及防治 8
3．3感染后的用药 8
致谢8
参考文献8
蛋鸡场三例散发性眼部肿物的诊断与治疗
动物医学院 安然
引言
引言
在规模化养鸡场的生产活动中，疾病的控制非常重要。养殖场需要通过正确的方法对疾病进行预防和控制。
马立克氏病是鸡常见的淋巴组织增生性疾病，眼型马立克多出现视力减退，虹膜失去正常色，呈同心环状或斑点状灰白色，瞳孔边缘不整齐、缩小等症状。由疱疹病毒引起。70年代研制出火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turke’s, HVT)疫苗后，使该病造成的损失大大降低，但对畜禽养殖业仍有潜在危害。结合临床症状，本实验首先对马立克病毒的存在进行了检测。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
鸡痘是由鸡痘病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。鸡易感性最高，在无毛少毛的皮肤上发生痘疹，眼型鸡痘表现为眼结膜发炎，从眼和鼻孔中流出水样分泌物，后变成淡黄色浓稠的脓液，时间稍长后由于眶下窦有炎症渗出物蓄积，引起眼部肿胀，可挤出干酪样凝固物质。
细菌感染也可引起眼部肿物，在正确使用抗生素的情况下，细菌感染通常可得到有效控制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物：江苏省句容市科兴畜禽养殖基地，共存栏约五万只蛋鸡，每个鸡舍内约7000只。两鸡舍内共发现两只300日龄、一只450日龄的眼部产生肿物的病鸡。
1.1.2实验仪器：SORVALL BIOFUGE PRIMO R离心机（Thermo scientific）、Eppendorf BioPhotometer Plus核酸蛋白测定仪、7500 real-time PCR System（Applied Biosystems）、水浴锅、简单手术器械、鸡胚等均由大学动物医学院临床应用分子生物学实验室提供。
1．2临床检查
查阅本鸡场资料，很少发现有患眼部肿物的情况。实习期间共发现三例类似病例，经仔细观察，病鸡同笼或邻近鸡无发病。病鸡发生于不同鸡舍中。
2月17日第一只病鸡发现于A鸡舍内，发现时已死亡，眼部肿物较硬，有少量液体流出，体重被毛较正常，邻近未发现类似病例，养殖人员没有引起足够重视，直接进行深埋处理。
3月10日病例二（图一）发现于B鸡舍，发现时眼部肿物直径约1cm，触摸有疼痛感，不时甩头，流出少量淡黄色液体。病鸡整体精神状态良好，被毛顺滑，饮水进食正常，未见消瘦，产蛋正常。
图一 病例二眼部肿物
4月25日病例三发现于A鸡舍，处于发病早期。眼睑周围逐渐肿大，约一周后肿大至无法看到眼球，流出淡黄色液体（图二），期间饮水进食产蛋正常，未见消瘦。后期治愈，肿物逐渐消失，视力恢复（图三），周围未发现类似病例。
图二 病例三眼部肿物 图三 病例三眼部肿物逐渐恢复
1.3剖检
对病例2进行了常规的病理剖检。重点检查眼部，气管，内脏器官等。
1．4 马立克氏病分子生物学诊断
1.4.1引物的设计
针对马立克病毒meq基因设计ORF全长的引物（表1-1），上游引物MEQ-F含EcoR I酶切位点；下游引物MEQ-R含Xho I酶切位点，扩增的目的片段长度为1039 bp，引物由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成，以病料总DNA为模板进行PCR扩增。
表1-1引物信息
Table1-1Information of primers
引物名称 Primersname 序列（5′→3′） Sequence 大小（bp） Size *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
meq MEQ-F gcgaattctatgtctcaggagccagagcc 1039
MEQ-R ttatctcgagtcagggtctcccgtcacc
1.4.2从组织样品中提取DNA
a取0.2g的组织样品，放入研磨器中，用小剪刀剪碎，向其中加入2ml裂解液。
b用研磨器将组织充分研磨。
c将研磨成的组织悬液抽取1ml转入2ml的离心管中，并于37℃温育1h。
d将温育好的离心管从温箱中取出，向其中加入蛋白酶K（20mg/ml）至终浓度100微克/ml。
e将细胞裂解液置于50℃水浴3h，不时旋转粘滞的溶液。
f将溶液冷却至室温，加入等体积的用0.1mol/L的Tris-Cl（PH=8）平衡过的苯酚。将离心管置于旋转器上摇匀。
g将离心管置于离心机上，室温5000g离心15min以分离两相。
h用枪头将离心后的水相转移至另一个离心管中
i用苯酚（加入同体积）在抽提两次
g第三次用苯酚抽提后，将水相转移至另一离心管中，加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵及2倍体积无水乙醇，用手摇匀。
k将离心管置于离心机再离心一次。将上清弃掉。
l用枪头吸尽离心管中的乙醇，将DNA沉淀置于敞开管内，直至乙醇挥发殆尽。
m向离心管中加入100微升TE摇匀,并进行低温保存。
1.4.3 测定DNA的浓度
三次测得2792.3μg/mL，2850.1μg/mL，2869.1μg/mL。平均值为2837.2μg/mL
-：空白对照 L：肝脏 Z：肿物 +：阳性对照 M：Marker D2000
采用MEQ-F/R以病料总DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后，结果如图。
摘要：引起鸡产生眼部肿物的原因主要有鸡马立克氏病、鸡痘、网状内皮增生症、细菌感染及外伤等，与养殖环境有密不可分的关系。本文通过对句容市科兴畜禽养殖基地三例蛋鸡眼部肿物的诊断与治疗，总结分析了此三个病例的发病情况、病理解剖、病原分子检测、病原鸡胚接种和治疗，得出结论为：该三例眼部肿物疾病为外科感染,可用抗生素治愈。可为蛋鸡养殖场提供参考资料。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
关键字:眼部肿物；蛋鸡；感染；诊断；治疗
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Keywords3
引言（或绪论）3
1材料与方法3
1.1材料3
1.1.1动物3
1.1.2实验3
1.2临床检查4
1.3剖检4
1．4 马立克氏病分子生物学诊断4
1.4.1引物的设计4
1.4.2从组织样品中提取DNA5
1.4.3测定DNA的浓度5
1.4.4 PCR扩增5
1.5病料鸡胚接种5
1．6用药 6
2 结果与分析 6
2．1剖检结果 6
2．2分子生物学诊断结果 6
2．3鸡胚接种结果 7
2．4小结 7
3讨论 7
3．1引起眼部肿物的病原 7
3．2本病的危害及防治 8
3．3感染后的用药 8
致谢8
参考文献8
蛋鸡场三例散发性眼部肿物的诊断与治疗
动物医学院 安然
引言
引言
在规模化养鸡场的生产活动中，疾病的控制非常重要。养殖场需要通过正确的方法对疾病进行预防和控制。
马立克氏病是鸡常见的淋巴组织增生性疾病，眼型马立克多出现视力减退，虹膜失去正常色，呈同心环状或斑点状灰白色，瞳孔边缘不整齐、缩小等症状。由疱疹病毒引起。70年代研制出火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turke’s, HVT)疫苗后，使该病造成的损失大大降低，但对畜禽养殖业仍有潜在危害。结合临床症状，本实验首先对马立克病毒的存在进行了检测。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
鸡痘是由鸡痘病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。鸡易感性最高，在无毛少毛的皮肤上发生痘疹，眼型鸡痘表现为眼结膜发炎，从眼和鼻孔中流出水样分泌物，后变成淡黄色浓稠的脓液，时间稍长后由于眶下窦有炎症渗出物蓄积，引起眼部肿胀，可挤出干酪样凝固物质。
细菌感染也可引起眼部肿物，在正确使用抗生素的情况下，细菌感染通常可得到有效控制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物：江苏省句容市科兴畜禽养殖基地，共存栏约五万只蛋鸡，每个鸡舍内约7000只。两鸡舍内共发现两只300日龄、一只450日龄的眼部产生肿物的病鸡。
1.1.2实验仪器：SORVALL BIOFUGE PRIMO R离心机（Thermo scientific）、Eppendorf BioPhotometer Plus核酸蛋白测定仪
1．2临床检查
查阅本鸡场资料，很少发现有患眼部肿物的情况。实习期间共发现三例类似病例，经仔细观察，病鸡同笼或邻近鸡无发病。病鸡发生于不同鸡舍中。
2月17日第一只病鸡发现于A鸡舍内，发现时已死亡，眼部肿物较硬，有少量液体流出，体重被毛较正常，邻近未发现类似病例，养殖人员没有引起足够重视，直接进行深埋处理。
3月10日病例二（图一）发现于B鸡舍，发现时眼部肿物直径约1cm，触摸有疼痛感，不时甩头，流出少量淡黄色液体。病鸡整体精神状态良好，被毛顺滑，饮水进食正常，未见消瘦，产蛋正常。
图一 病例二眼部肿物
4月25日病例三发现于A鸡舍，处于发病早期。眼睑周围逐渐肿大，约一周后肿大至无法看到眼球，流出淡黄色液体（图二），期间饮水进食产蛋正常，未见消瘦。后期治愈，肿物逐渐消失，视力恢复（图三），周围未发现类似病例。
图二 病例三眼部肿物 图三 病例三眼部肿物逐渐恢复
1.3剖检
对病例2进行了常规的病理剖检。重点检查眼部，气管，内脏器官等。
1．4 马立克氏病分子生物学诊断
1.4.1引物的设计
针对马立克病毒meq基因设计ORF全长的引物（表1-1），上游引物MEQ-F含EcoR I酶切位点；下游引物MEQ-R含Xho I酶切位点，扩增的目的片段长度为1039 bp，引物由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成，以病料总DNA为模板进行PCR扩增。
表1-1引物信息
Table1-1Information of primers
引物名称 Primersname 序列（5′→3′） Sequence 大小（bp） Size *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
meq MEQ-F gcgaattctatgtctcaggagccagagcc 1039
MEQ-R ttatctcgagtcagggtctcccgtcacc
1.4.2从组织样品中提取DNA
a取0.2g的组织样品，放入研磨器中，用小剪刀剪碎，向其中加入2ml裂解液。
b用研磨器将组织充分研磨。
c将研磨成的组织悬液抽取1ml转入2ml的离心管中，并于37℃温育1h。
d将温育好的离心管从温箱中取出，向其中加入蛋白酶K（20mg/ml）至终浓度100微克/ml。
e将细胞裂解液置于50℃水浴3h，不时旋转粘滞的溶液。
f将溶液冷却至室温，加入等体积的用0.1mol/L的Tris-Cl（PH=8）平衡过的苯酚。将离心管置于旋转器上摇匀。
g将离心管置于离心机上，室温5000g离心15min以分离两相。
h用枪头将离心后的水相转移至另一个离心管中
i用苯酚（加入同体积）在抽提两次
g第三次用苯酚抽提后，将水相转移至另一离心管中，加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵及2倍体积无水乙醇，用手摇匀。
k将离心管置于离心机再离心一次。将上清弃掉。
l用枪头吸尽离心管中的乙醇，将DNA沉淀置于敞开管内，直至乙醇挥发殆尽。
m向离心管中加入100微升TE摇匀,并进行低温保存。
1.4.3 测定DNA的浓度
三次测得2792.3μg/mL，2850.1μg/mL，2869.1μg/mL。平均值为2837.2μg/mL
-：空白对照 L：肝脏 Z：肿物 +：阳性对照 M：Marker D2000
采用MEQ-F/R以病料总DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后，结果如图。
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