母体妊娠期和哺乳期饲喂高脂日粮对子代鼠肝脏脂代谢的影响
本实验旨在通过在SD大鼠妊娠期和哺乳期给予高脂日粮，探索母鼠妊娠期和哺乳期肥胖对子代肝脏脂代谢的影响。成年SD孕鼠20只随机分为对照组与高脂组，在妊娠期和哺乳期分别给予普通日粮与高脂日粮。仔鼠3周断奶后处死，称量体重、肝脏重，检测血液生化指标与肝脏甘油三酯含量，实时荧光定量PCR检测肝脏组织脂代谢相关基因ACC、FASN、HSL、SREBP1、PPARγ等的mRNA表达水平。实验结果高脂组的体重、肝脏重均高于对照组；血浆TG、TC、LDL以及肝脏TG水平均高于对照组；ACC、FASN的mRNA表达水平下降；HSL、SREBP1、PPARγ的mRNA表达水平无明显改变。本实验结果表明SD大鼠妊娠期和哺乳期摄入高脂日粮造成子代肥胖、血脂异常、肝脏脂代谢相关基因表达水平失调等脂代谢紊乱。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1.1 实验材料 2
1.1.1 实验动物 2
1.1.2 实验饲料配方 2
1.1.3 主要仪器 2
1.2 实验动物分组及样品采集 3
1.3 血浆及肝脏中生化指标测定 3
1.3.1 血浆生化指标测定 3
1.3.2 肝脏中TG的测定 3
1.4 RealTim PCR检测肝脏组织脂代谢相关酶 3
1.4.1 主要试剂 3
1.4.2 组织总RNA的提取 3
1.4.3 反转录 3
1.4.4 实时荧光相对定量PCR 3
1.5 数据分析及统计 4
2 结果与分析 4
2.1 高脂对子代体重及肝脏重的影响 4
2.2 高脂对子代血浆及肝脏生化指标的影响 4
2.2.1 高脂对子代血浆生化指标的影响 4
2.2.2 高脂对子代肝脏中TG的影响 5
2.3 高脂对子代脂代谢相关基因表达的影响 5
3 讨论 5
致谢6
参考文献7
母体妊娠期和哺乳期添加高脂日粮 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
对子代肝脏脂代谢的影响
引言
肥胖是成人代谢综合征的症状之一，也是现代社会常见、多发的营养代谢障碍性疾病。随着我国社会经济的发展，物质水平的提高，我国的饮食习惯有高脂化的趋势，育龄期妇女过度进食和活动不足而导致的孕期肥胖，已经成为严重的公共卫生问题之一。
国外有研究表明，成年期肥胖的发生不仅与个体不良饮食结构有关，更取决于其营养代谢模式[1,3]。妊娠期，胚胎或胎儿为了最大限度的提高生存的机会，会根据宫内营养状况自发的调节自身的营养代谢模式以适应不良的宫内环境。若母体营养过剩，胎儿会为了适应宫内这种高营养状态，将会呈现一种低吸收、低储存、高能耗的代谢模式，以维持生长发育且使体重不至于过高影响顺利分娩。由于胎儿期这种代谢状态改变涉及遗传缺陷，所以出生后仍将持续；但其作用将会在个体出生后收到环境因素的影响而被增强或者减弱，由此产生不同的表型（发生或不发生成年期肥胖）[2,49]。
目前，生命早期母源性营养过剩影响儿童期脂代谢的研究相对较少，且结论不一。本课题通过孕哺期大鼠饲喂高脂日粮，探索母体营养过剩对子代肝脏脂代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
选择育龄期未孕SD大鼠为实验动物，由江苏省中医药研究院实验动物中心提供。其中雌性大鼠20只，体重200250g；雄性大鼠8只，体重300350g，用于交配。
1.1.2 实验饲料配方
Ⅰ繁殖型基础日粮
表1 繁殖型基础日粮
质量比
能值cal/g
能量比
粗蛋白
22.00%
4005.68
25.00%
粗脂肪
6.50%
9002.31
16.60%
碳水化合物
51.50%
3997.28
58.40%
其他
20.00%
0.00
0.00%
合计
100.00%
17005.27
100.00%
Ⅱ实验用日粮
表2 实验用日粮
对照组
高脂组
基础料/kg
100.00%
79.30%
猪油/kg
13.80%
胆固醇/g
1.00%
胆酸钠/g
0.50%
酪蛋白/g
5.40%
合计
100.00%
100.00%
1.1.3 主要仪器
显微镜、电子称、贝克曼低温高速离心机、Mx300P RealTime PCR仪（Stratagene，美国）等。
1.2 实验动物分组及样品采集
适应性饲养一周后，将雄、雌鼠按1：2合笼交配，观察阴道栓并进行阴道涂片确定是否受孕。雌鼠经确认怀孕后，记录其受孕时间，随机分为对照组与高脂组，分别投喂基础日粮与高脂日粮。将受孕母鼠单弄饲养，自由摄食饮水至自然分娩及仔鼠断奶后。
在母鼠产后两小时内记录产活子数，死胎数，窝重。在产后第21天断奶并记录小鼠数量，窝重。
断奶后的仔鼠，21：00禁食，第二天9：00称量体重。按0.3mL/100g体重注射10%水合氯醛麻醉，解剖，获得肝脏，进行称重并置于液氮中迅速冷冻，于70℃保存。用10mg/mL肝素钠生理盐水制备的5mL抗凝针管采集腹腔静脉血，3000r/min、4℃离心30min得血浆，20℃保存。
1.3 血浆及肝脏中生化指标测定
1.3.1 血浆生化指标测定
血浆中的葡萄糖、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平使用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定。
1.3.2 肝脏中TG的测定
采用氯仿/甲醇萃取法提取肝脏中的TG。使用试剂盒进行测定。
1.4 RealTime PCR 检测肝脏组织脂代谢相关酶
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 材料与方法 2
1.1 实验材料 2
1.1.1 实验动物 2
1.1.2 实验饲料配方 2
1.1.3 主要仪器 2
1.2 实验动物分组及样品采集 3
1.3 血浆及肝脏中生化指标测定 3
1.3.1 血浆生化指标测定 3
1.3.2 肝脏中TG的测定 3
1.4 RealTim PCR检测肝脏组织脂代谢相关酶 3
1.4.1 主要试剂 3
1.4.2 组织总RNA的提取 3
1.4.3 反转录 3
1.4.4 实时荧光相对定量PCR 3
1.5 数据分析及统计 4
2 结果与分析 4
2.1 高脂对子代体重及肝脏重的影响 4
2.2 高脂对子代血浆及肝脏生化指标的影响 4
2.2.1 高脂对子代血浆生化指标的影响 4
2.2.2 高脂对子代肝脏中TG的影响 5
2.3 高脂对子代脂代谢相关基因表达的影响 5
3 讨论 5
致谢6
参考文献7
母体妊娠期和哺乳期添加高脂日粮 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
对子代肝脏脂代谢的影响
引言
肥胖是成人代谢综合征的症状之一，也是现代社会常见、多发的营养代谢障碍性疾病。随着我国社会经济的发展，物质水平的提高，我国的饮食习惯有高脂化的趋势，育龄期妇女过度进食和活动不足而导致的孕期肥胖，已经成为严重的公共卫生问题之一。
国外有研究表明，成年期肥胖的发生不仅与个体不良饮食结构有关，更取决于其营养代谢模式[1,3]。妊娠期，胚胎或胎儿为了最大限度的提高生存的机会，会根据宫内营养状况自发的调节自身的营养代谢模式以适应不良的宫内环境。若母体营养过剩，胎儿会为了适应宫内这种高营养状态，将会呈现一种低吸收、低储存、高能耗的代谢模式，以维持生长发育且使体重不至于过高影响顺利分娩。由于胎儿期这种代谢状态改变涉及遗传缺陷，所以出生后仍将持续；但其作用将会在个体出生后收到环境因素的影响而被增强或者减弱，由此产生不同的表型（发生或不发生成年期肥胖）[2,49]。
目前，生命早期母源性营养过剩影响儿童期脂代谢的研究相对较少，且结论不一。本课题通过孕哺期大鼠饲喂高脂日粮，探索母体营养过剩对子代肝脏脂代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
选择育龄期未孕SD大鼠为实验动物，由江苏省中医药研究院实验动物中心提供。其中雌性大鼠20只，体重200250g；雄性大鼠8只，体重300350g，用于交配。
1.1.2 实验饲料配方
Ⅰ繁殖型基础日粮
表1 繁殖型基础日粮
质量比
能值cal/g
能量比
粗蛋白
22.00%
4005.68
25.00%
粗脂肪
6.50%
9002.31
16.60%
碳水化合物
51.50%
3997.28
58.40%
其他
20.00%
0.00
0.00%
合计
100.00%
17005.27
100.00%
Ⅱ实验用日粮
表2 实验用日粮
对照组
高脂组
基础料/kg
100.00%
79.30%
猪油/kg
13.80%
胆固醇/g
1.00%
胆酸钠/g
0.50%
酪蛋白/g
5.40%
合计
100.00%
100.00%
1.1.3 主要仪器
显微镜、电子称、贝克曼低温高速离心机、Mx300P RealTime PCR仪（Stratagene，美国）等。
1.2 实验动物分组及样品采集
适应性饲养一周后，将雄、雌鼠按1：2合笼交配，观察阴道栓并进行阴道涂片确定是否受孕。雌鼠经确认怀孕后，记录其受孕时间，随机分为对照组与高脂组，分别投喂基础日粮与高脂日粮。将受孕母鼠单弄饲养，自由摄食饮水至自然分娩及仔鼠断奶后。
在母鼠产后两小时内记录产活子数，死胎数，窝重。在产后第21天断奶并记录小鼠数量，窝重。
断奶后的仔鼠，21：00禁食，第二天9：00称量体重。按0.3mL/100g体重注射10%水合氯醛麻醉，解剖，获得肝脏，进行称重并置于液氮中迅速冷冻，于70℃保存。用10mg/mL肝素钠生理盐水制备的5mL抗凝针管采集腹腔静脉血，3000r/min、4℃离心30min得血浆，20℃保存。
1.3 血浆及肝脏中生化指标测定
1.3.1 血浆生化指标测定
血浆中的葡萄糖、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平使用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定。
1.3.2 肝脏中TG的测定
采用氯仿/甲醇萃取法提取肝脏中的TG。使用试剂盒进行测定。
1.4 RealTime PCR 检测肝脏组织脂代谢相关酶
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