某猪场猪链球菌致病血清型1279型检测及防控措施
致病性猪链球菌是生猪养殖中重要的病原之一。常州某猪场发生猪链球菌疫情，采集病料，设计猪链球菌种型鉴定和血清型特异性引物,进行多重PCR的检测，在猪场疫区分离细菌55株中，检测结果发现检出30株猪链球菌2型菌株，一株1型菌株，其余菌株均为检测到，在后期针对生猪养殖一发疫病的情况，课题设计了饲料加药和饲料添加剂进行平行试验比较，结果发现加药以及添加剂后料肉比有0.1的上升，接近正常水平，发病率降低12.1%，死亡率高了0.5%。 上述结果显示，此次试验设计引物在实践中检测具有较好的敏感性，加药结果有效的增强了猪的抵抗力，减少了猪场的损失，为今后相应临床检验防控疾病提供了参考依据。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words4
引言4
1材料与方法4
1.1材料 4
1.2.1 菌株及来源4
1.2.2 主要试剂4
1.2.3 主要仪器4
1.2.4 病料采集所需物品4
1.2.5 加药及添加剂5
1.2 方法 5
1.2.1细菌培养5
1.2.2引物合成5
1.2.3模版制作5
1.2.4PCR扩增5
1.2.5猪场采集病料5
1.2.6分离细菌5
1.2.7饲料加药及添加剂5
2结果与分析5
2.1多重PCR结果5
2.2猪场病料及PCR结果6
2.3饲料加药添加剂实验结果7
3讨论 7
致谢8
参考文献8
图1 猪场链球菌多重PCR检测结果6
图2 阴性对照株PCR检测结果6
表1 加药及饲料添加剂后生长结果统计7
表2 加药及饲料添加剂免疫力抗病能力统计表7
常州某猪场猪链球菌致病血清型1、2、7、9
型检测及防控措施
引言
链球菌(streptococcus)在自然界中广泛存在且种类繁多，其中有非致 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
病菌，是动物正常菌群，还有一些是动物的致病菌，如化脓性链球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、马链球菌兽疫亚种等，同时许多可引起动物以及人类的化脓性疾病、肺炎、败血症等[1]。其中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原体,能导致脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症,对公共卫生和养猪业构成严重威胁[2],也可以引起人的急性脑膜炎、感染性中毒休克综合征等疾病。猪链球菌病几乎危及所有规模化养猪国家[3]。其中猪链球菌主要感染猪[45]。1950年以后荷兰、英国、美国、巴西、意大利等许多国家先后报道了猪链球菌病[6]。根据猪链球菌荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)抗原性的不同[7],可将其分为35个血清型(134以及1/2),其中6中血清型主要导致疾病的发生[8]。因近年来未见有14型发病的报道，因此本文对此不作讨论与研究[9]。此次试验主要研究1型、2型、7型和9型致病株可能会引起猪场疫情的菌株作为主要研究对象进行检测。此次试验主要通过谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydroogenase,gdh)和主要致病血清型抗原编码的猪链球菌荚膜多糖基因的差异,设计1对引物,优化已建立较为完善的多重PCR检测体系,対已知来源菌株进行检测来确立引物的可用性。再从猪场采集病料中分离细菌，用于更准确地确定致病株的细菌类型。同时也能更好的确定引起猪场疫情菌种，从而得出最好的防治措施。对于检测出致病菌我们也提供相应加药措施来提供猪自身免疫力来减缓疫情爆发，为减少猪场不必要的损失提供一个依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌株及来源
背景明确的临床分离菌株35株，其中其他细菌8株包括沙门氏菌1株，类志贺菌1株，金黄色葡萄球菌1株，流感嗜血杆菌1株，其他链球菌4株。其中20株来自猪场实验室(9801、HAbb、98002、98T003、8014、8019、T15、SS13 (10581)、SS14 (13730)、SS15(GRT639NCTC10446)、SS16(2726)、SS17(93A)、SS28 (89590)、SS29 (921791)、SS30(921400)、SS31 (924172)SS18(C77)、SS19(42A)、SS34(922742))，其余7株由大学实验室提供给猪场。
1．1．2 主要试剂 蛋白酶K为Merck公司产品,PCR扩增试剂盒DRR001AM为(大连)宝生物工程有限公司的产品
1．1．3 主要仪器 高速冷冻离心机（BECKMAN COULTER）、微型离心机（Eppendorf）、核酸电泳仪（南京科宝仪器研究所），凝胶自动成像系统（BioRad）、PCR仪（BioRad/Biometra）
1．1．4 病料采集所需用品 屠宰用刀一把，手术刀片一包，手术刀柄一把，塑封袋若干，口罩一包
1．1．5 加药及添加剂 黄芪多糖500g/次，鱼腥草500g/次，维生素c，烟酰胺50200依情况单位每次，阿莫西林300500g/次，氨苄西林500g/次，头孢500g/次，甜味剂（避免引起影响猪的采食量）
1．2 方法
1．2．1 细菌培养 取上述菌株分别接种于50g／L绵羊血平板，37℃培养18～24h，挑取单菌落接种液体培养基，37℃培养过夜。
1．2．2 引物合成 根据GenBank检索的gdh以及荚膜多糖编码基因核酸基因序列（GenBank登录号CP000672.1）利用软件Primer6.0设计5对引物,引物由上海英俊生物公司合成，稀释成浓度为10pmol/μL溶液，20℃保存。引物序列如下：
名称
因为序列
位点
长度
gdh
5‘TCAAGTCAACCGTGGCTA3’
534551
657
5‘TATTCTGTCAAACGAGCG3’
1 1901 173
Cps1
5‘GTTGAGTCCTTATACACCTGTT3’
13 877 13 898
450
5‘CAGAAAATTCATATTGTCCACC3’
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words4
引言4
1材料与方法4
1.1材料 4
1.2.1 菌株及来源4
1.2.2 主要试剂4
1.2.3 主要仪器4
1.2.4 病料采集所需物品4
1.2.5 加药及添加剂5
1.2 方法 5
1.2.1细菌培养5
1.2.2引物合成5
1.2.3模版制作5
1.2.4PCR扩增5
1.2.5猪场采集病料5
1.2.6分离细菌5
1.2.7饲料加药及添加剂5
2结果与分析5
2.1多重PCR结果5
2.2猪场病料及PCR结果6
2.3饲料加药添加剂实验结果7
3讨论 7
致谢8
参考文献8
图1 猪场链球菌多重PCR检测结果6
图2 阴性对照株PCR检测结果6
表1 加药及饲料添加剂后生长结果统计7
表2 加药及饲料添加剂免疫力抗病能力统计表7
常州某猪场猪链球菌致病血清型1、2、7、9
型检测及防控措施
引言
链球菌(streptococcus)在自然界中广泛存在且种类繁多，其中有非致 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
病菌，是动物正常菌群，还有一些是动物的致病菌，如化脓性链球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、马链球菌兽疫亚种等，同时许多可引起动物以及人类的化脓性疾病、肺炎、败血症等[1]。其中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原体,能导致脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症,对公共卫生和养猪业构成严重威胁[2],也可以引起人的急性脑膜炎、感染性中毒休克综合征等疾病。猪链球菌病几乎危及所有规模化养猪国家[3]。其中猪链球菌主要感染猪[45]。1950年以后荷兰、英国、美国、巴西、意大利等许多国家先后报道了猪链球菌病[6]。根据猪链球菌荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)抗原性的不同[7],可将其分为35个血清型(134以及1/2),其中6中血清型主要导致疾病的发生[8]。因近年来未见有14型发病的报道，因此本文对此不作讨论与研究[9]。此次试验主要研究1型、2型、7型和9型致病株可能会引起猪场疫情的菌株作为主要研究对象进行检测。此次试验主要通过谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydroogenase,gdh)和主要致病血清型抗原编码的猪链球菌荚膜多糖基因的差异,设计1对引物,优化已建立较为完善的多重PCR检测体系,対已知来源菌株进行检测来确立引物的可用性。再从猪场采集病料中分离细菌，用于更准确地确定致病株的细菌类型。同时也能更好的确定引起猪场疫情菌种，从而得出最好的防治措施。对于检测出致病菌我们也提供相应加药措施来提供猪自身免疫力来减缓疫情爆发，为减少猪场不必要的损失提供一个依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌株及来源
背景明确的临床分离菌株35株，其中其他细菌8株包括沙门氏菌1株，类志贺菌1株，金黄色葡萄球菌1株，流感嗜血杆菌1株，其他链球菌4株。其中20株来自猪场实验室(9801、HAbb、98002、98T003、8014、8019、T15、SS13 (10581)、SS14 (13730)、SS15(GRT639NCTC10446)、SS16(2726)、SS17(93A)、SS28 (89590)、SS29 (921791)、SS30(921400)、SS31 (924172)SS18(C77)、SS19(42A)、SS34(922742))，其余7株由大学实验室提供给猪场。
1．1．2 主要试剂 蛋白酶K为Merck公司产品,PCR扩增试剂盒DRR001AM为(大连)宝生物工程有限公司的产品
1．1．3 主要仪器 高速冷冻离心机（BECKMAN COULTER）、微型离心机（Eppendorf）、核酸电泳仪（南京科宝仪器研究所），凝胶自动成像系统（BioRad）、PCR仪（BioRad/Biometra）
1．1．4 病料采集所需用品 屠宰用刀一把，手术刀片一包，手术刀柄一把，塑封袋若干，口罩一包
1．1．5 加药及添加剂 黄芪多糖500g/次，鱼腥草500g/次，维生素c，烟酰胺50200依情况单位每次，阿莫西林300500g/次，氨苄西林500g/次，头孢500g/次，甜味剂（避免引起影响猪的采食量）
1．2 方法
1．2．1 细菌培养 取上述菌株分别接种于50g／L绵羊血平板，37℃培养18～24h，挑取单菌落接种液体培养基，37℃培养过夜。
1．2．2 引物合成 根据GenBank检索的gdh以及荚膜多糖编码基因核酸基因序列（GenBank登录号CP000672.1）利用软件Primer6.0设计5对引物,引物由上海英俊生物公司合成，稀释成浓度为10pmol/μL溶液，20℃保存。引物序列如下：
名称
因为序列
位点
长度
gdh
5‘TCAAGTCAACCGTGGCTA3’
534551
657
5‘TATTCTGTCAAACGAGCG3’
1 1901 173
Cps1
5‘GTTGAGTCCTTATACACCTGTT3’
13 877 13 898
450
5‘CAGAAAATTCATATTGTCCACC3’
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