犬巴贝斯虫pcr检测方法的优化犬巴贝斯虫pcr检测方法的优化(附件)【字数：6634】
1为了提高犬巴贝斯虫PCR检测方法的准确性和可靠性，通过采用控制单一变量方法改变PCR反应程序的设定、DNA提取方法与抗凝剂的选择，优化犬巴贝斯虫的检测时间和检测效率，提高检测方法的特异性和敏感性。本研究采集病犬血液样品，提取基因组DNA，PCR扩增特定基因片段，凝胶琼脂电泳，紫外分析仪下观察电泳条带的亮暗程度来分析合适的PCR方法、抗凝剂以及DNA提取方案。试验结果显示，在25 uL的PCR反应体系中，设置参数为退火温度设置为56℃，退火时间为30s，延伸时间为30s，抗凝剂选取柠檬酸钠，蛋白酶消化1 h。本试验优化的PCR检测方法能够有效地缩短检测时间，提升检测效率，扩增出清晰的条带，最终实现快速、简便、准确地检测犬巴贝斯虫病。
目 录
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料的采集及处理2
1.2初诊2
1.3血液总基因组DNA的提取3
1.4 PCR反应程序4
1.5 PCR反应条件优化4
2 结果与分析4
2.1 PCR反应程序的优化4
2.2不同抗凝剂的选择优化5
2.3不同DNA提取方案的优化6
3讨论 7
致谢8
参考文献8
犬巴贝斯虫PCR检测方法的优化
动物药学专业学生 周而璇
指导教师 赵艳兵
Optimization of PCR detection Methods for canine BABESIOSIS
Student majoring in veterinary pharmacy Erxuan Zhou
Tutor Yanbing Zhao
Abstract：In order to improve the accuracy and reliability of canine babesiosis PCR detection method, the control method was used to change th *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
e setting of PCR reaction program, the method of DNA extraction and the choice of anticoagulant, and to optimize the detection time and detection efficiency of canine babesiosis. In this experiment, the experiment was carried out by the experimental man in the Nanjing Agricultural University veterinary hospital clinical collection of dog blood samples, extracted genomic DNA, PCR amplification of specific gene fragments, gel agar electrophoresis, UV analyzer to observe the degree of darkness of the electrophoretic band to analyze the appropriate PCR Methods, anticoagulants, and DNA extraction protocols. The experimental results show that the annealing temperature is set to 56 °, the annealing time is 30s, the refolding time is 30s, the anticoagulant is selected from sodium citrate and the phenol is digested for 1h. In this experiment, the optimized PCR detection method can effectively shorten the detection time, improve the detection efficiency, expand the clear and larger bands, and finally achieve rapid, simple and accurate detection of canine bacillae disease.
Key words: Babesia, PCR detection, control variables, optimization.
犬巴贝斯虫病是一种由寄生虫引起的血液原虫性疾病，它的病原包括犬巴贝斯虫（Babesia canis）、韦氏巴贝斯虫（B.vogeli）、吉氏巴贝斯虫（B.gibsoni）。病原类属：巴贝斯科巴贝斯属，它的临诊症状有犬猫体温升高（发热）、红细胞数量减少、可视粘膜苍白或发黄、血尿、精神不振甚至停止进食，急性巴贝斯虫病具有病程急、致死率高的特点。病犬常常伴有血小板减小、胆红素升高、肝脏功能受损、肾功能不全、血糖下降。巴贝斯虫是由长角血蜱（Haemapysalislongicrnis）和血红扇头蜱（Rhipicephalus sanguinus）广泛传播的，在国内广泛分布，主要在春夏秋季蜱虫活跃的季节多发[2]。
目前国内检测犬巴贝斯虫的方法较为成熟，血涂片染色镜检观察、酶联免疫吸附反应（ELISA）、间接荧光试验（IFA）、聚合酶链式反应（PCR）等方法。血涂片染色镜检观察法虽然对设备要求很低，只需要光学显微镜即可，操作难度低，检测时间短、要求少，然而与此同时带来的结果是犬巴贝斯虫阳性检出率偏低，并且在检测犬巴贝斯虫隐性带虫感染宿主动物时，使用显微镜观察出现假阴性现象可能性大，此外利用血清学血涂片观察诊断法的缺点是实验师不能区别出阳性结果是当前季节现发感染还是以前感染治愈后的残留[5]。为了获得具有较高的特异性和敏感性的检测方法，学者们进行研究实验发现PCR技术对于检测巴贝斯虫感染十分有效、PCR方法具有操作难度低，试验时间较短，检测所需试剂保存期长、获取方便的好处，并且可以结合多项实验诸如犬巴贝斯虫特定基因序列测定分析，来对犬巴贝斯虫虫体种类进行分析[7]。因此，作为最为有效和准确地检测犬巴贝斯虫病的实验室检测方法，有必要研讨和优化其具体的检测程序。
目 录
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料的采集及处理2
1.2初诊2
1.3血液总基因组DNA的提取3
1.4 PCR反应程序4
1.5 PCR反应条件优化4
2 结果与分析4
2.1 PCR反应程序的优化4
2.2不同抗凝剂的选择优化5
2.3不同DNA提取方案的优化6
3讨论 7
致谢8
参考文献8
犬巴贝斯虫PCR检测方法的优化
动物药学专业学生 周而璇
指导教师 赵艳兵
Optimization of PCR detection Methods for canine BABESIOSIS
Student majoring in veterinary pharmacy Erxuan Zhou
Tutor Yanbing Zhao
Abstract：In order to improve the accuracy and reliability of canine babesiosis PCR detection method, the control method was used to change th *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
e setting of PCR reaction program, the method of DNA extraction and the choice of anticoagulant, and to optimize the detection time and detection efficiency of canine babesiosis. In this experiment, the experiment was carried out by the experimental man in the Nanjing Agricultural University veterinary hospital clinical collection of dog blood samples, extracted genomic DNA, PCR amplification of specific gene fragments, gel agar electrophoresis, UV analyzer to observe the degree of darkness of the electrophoretic band to analyze the appropriate PCR Methods, anticoagulants, and DNA extraction protocols. The experimental results show that the annealing temperature is set to 56 °, the annealing time is 30s, the refolding time is 30s, the anticoagulant is selected from sodium citrate and the phenol is digested for 1h. In this experiment, the optimized PCR detection method can effectively shorten the detection time, improve the detection efficiency, expand the clear and larger bands, and finally achieve rapid, simple and accurate detection of canine bacillae disease.
Key words: Babesia, PCR detection, control variables, optimization.
犬巴贝斯虫病是一种由寄生虫引起的血液原虫性疾病，它的病原包括犬巴贝斯虫（Babesia canis）、韦氏巴贝斯虫（B.vogeli）、吉氏巴贝斯虫（B.gibsoni）。病原类属：巴贝斯科巴贝斯属，它的临诊症状有犬猫体温升高（发热）、红细胞数量减少、可视粘膜苍白或发黄、血尿、精神不振甚至停止进食，急性巴贝斯虫病具有病程急、致死率高的特点。病犬常常伴有血小板减小、胆红素升高、肝脏功能受损、肾功能不全、血糖下降。巴贝斯虫是由长角血蜱（Haemapysalislongicrnis）和血红扇头蜱（Rhipicephalus sanguinus）广泛传播的，在国内广泛分布，主要在春夏秋季蜱虫活跃的季节多发[2]。
目前国内检测犬巴贝斯虫的方法较为成熟，血涂片染色镜检观察、酶联免疫吸附反应（ELISA）、间接荧光试验（IFA）、聚合酶链式反应（PCR）等方法。血涂片染色镜检观察法虽然对设备要求很低，只需要光学显微镜即可，操作难度低，检测时间短、要求少，然而与此同时带来的结果是犬巴贝斯虫阳性检出率偏低，并且在检测犬巴贝斯虫隐性带虫感染宿主动物时，使用显微镜观察出现假阴性现象可能性大，此外利用血清学血涂片观察诊断法的缺点是实验师不能区别出阳性结果是当前季节现发感染还是以前感染治愈后的残留[5]。为了获得具有较高的特异性和敏感性的检测方法，学者们进行研究实验发现PCR技术对于检测巴贝斯虫感染十分有效、PCR方法具有操作难度低，试验时间较短，检测所需试剂保存期长、获取方便的好处，并且可以结合多项实验诸如犬巴贝斯虫特定基因序列测定分析，来对犬巴贝斯虫虫体种类进行分析[7]。因此，作为最为有效和准确地检测犬巴贝斯虫病的实验室检测方法，有必要研讨和优化其具体的检测程序。
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