一株地区i群4型禽腺病毒（js2016株）一株地区i群4型禽腺病毒（js2016株）的分离鉴定(附件)【字数：9784】
32016年7月，江苏某鸡场40日龄鸡群发生了以心包积水为典型特征的疫病，发病率约为50%。采集心包积水的病鸡肝脏、心脏等病料进行FAdV-4 PCR检测，结果呈阳性。将病料接种SPF鸡胚进行病毒分离，并对接种后的鸡胚尿囊液进行禽腺病毒的FAdV-4 PCR检测，检测结果也呈阳性。将SPF鸡胚分离的病毒命名为禽腺病毒4型JS-2016株。该病毒没有血凝性。扩增分离的JS-2016株Hexon基因，经序列测定分析结果表明该毒株与国内外禽腺病毒4型毒株的同源率为98%，说明此次从心包积水综合征病死鸡中分离的病毒为禽腺病毒Ⅰ群4型。本研究为今后对FAdV-4病原特性及疫苗的研制提供基础材料。
目 录
Abstract3
Key word3
引言3
1 材料与方法4
1.1 患病鸡病料4
1.2 试剂及仪器5
1.2.1 主要试剂5
1.2.2 主要仪器5
1.3 方法5
1.3.1 鸡胚的尿囊腔接种5
1.3.2 尿囊液的收取6
1.3.3 DNA的提取6
1.3.4 PCR扩增6
1.3.5 琼脂糖凝胶电泳分析7
1.3.6 血凝实验7
1.3.7 PCR扩增产物的回收与纯化7
1.3.8 序列测定与分析8
2 结果与分析8
2.1 临床患病鸡组织样品的PCR检测结果8
2.2 禽腺病毒阳性病料接种DF1细胞分离病毒的结果9
2.3 鸡胚接种病毒分离结果10
2.4 血凝试验结果11
2.5 测序结果及分析11
3 讨论13
致谢15
参考文献16
一株江苏地区Ⅰ群4型禽腺病毒（JS2016株）的分离鉴定
动物医学专业学生 张生东
指导老师 曹瑞兵
Isolation and Identification of one fowl adenovirus group I serotype 4 (JS2016) in Jiangsu Provi *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
nce
Student majoring in Veterinary Medicine ZHANG ShengDong
Tutor CAO RuiBing
Abstract：In July 2016, a typical disease characterized by pericardial water outbreak in 40dayold chicken herds at a farm in Jiangsu Province, and the incidence is about 50%. The pathologic tissues such as heart and liver were collected from the diseased chickens. For FAdV4 PCR detection, the result was positive. I isolate the virus by inoculation treated tissue materials to SPF chicken embryo, and collect the chicken embryo allantoic fluid for FAdV4 PCR detection, the result was also positive. I named the virus that isolated from SPF chicken embryo as avian adenovirus strain JS2016. The isolated virus showed no hemagglutination activity. Amplification of the isolated JS2016 strain Hexon gene, the results of sequence analysis showed that the homology of this strain was 98% with the avian adenovirus serotype 4 strains at domestic and abroad. Indicating that the virus that isolated from the chickens expressed hydropericadium syndrome was the avian adenovirus group I serotype 4. This study paved a way for the future vaccine development and pathogenicity exploring of FAdV4.
Key words: Angara disease; Avian adenovirus type 4; JS2016 strain; Isolation; Identification
引言
自2015年6月以来，中国河南、山东、河北、辽宁、安徽、吉林等省的部分地区鸡群发生了以心包积水、肝脏肿大为特征的心包积水综合征[13]。该病主要发生于3~6周龄的肉鸡，后备母鸡和蛋鸡也偶有发生，病程8~15天，病死率达20%~60%。
禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAdV）属于腺病毒科禽腺病毒属，根据其群特异性抗原的不同，禽腺病毒可分为I、II和III 3个群。I群禽腺病毒具有共同的群抗原，II群禽腺病毒与I群禽腺病毒基本无抗原相关性，III群禽腺病毒与I群禽腺病毒只含有部分共同抗原[46]。根据限制性酶切图谱以及血清交叉中和反应的特点，可将禽腺病毒分为5个基因（A~E），12个血清型（FAV1~12）。I群禽腺病毒的代表株有：禽包涵体肝炎（IBH）、肌胃糜烂和溃疡（GEU）、心包积水综合征（HPS）等；II群禽腺病毒代表株有：火鸡出血性肠炎病毒（HEV）、雄鸡大理石脾病毒（MSDV）、禽类脾肿大病毒（AASV）等；III群禽腺病毒只有唯一一个代表株：减蛋综合征（EDV）。其中I群FAdV中C种FAdV4型认为是引起鸡心包积水综合征的主要病原之一[7]。
目 录
Abstract3
Key word3
引言3
1 材料与方法4
1.1 患病鸡病料4
1.2 试剂及仪器5
1.2.1 主要试剂5
1.2.2 主要仪器5
1.3 方法5
1.3.1 鸡胚的尿囊腔接种5
1.3.2 尿囊液的收取6
1.3.3 DNA的提取6
1.3.4 PCR扩增6
1.3.5 琼脂糖凝胶电泳分析7
1.3.6 血凝实验7
1.3.7 PCR扩增产物的回收与纯化7
1.3.8 序列测定与分析8
2 结果与分析8
2.1 临床患病鸡组织样品的PCR检测结果8
2.2 禽腺病毒阳性病料接种DF1细胞分离病毒的结果9
2.3 鸡胚接种病毒分离结果10
2.4 血凝试验结果11
2.5 测序结果及分析11
3 讨论13
致谢15
参考文献16
一株江苏地区Ⅰ群4型禽腺病毒（JS2016株）的分离鉴定
动物医学专业学生 张生东
指导老师 曹瑞兵
Isolation and Identification of one fowl adenovirus group I serotype 4 (JS2016) in Jiangsu Provi *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
nce
Student majoring in Veterinary Medicine ZHANG ShengDong
Tutor CAO RuiBing
Abstract：In July 2016, a typical disease characterized by pericardial water outbreak in 40dayold chicken herds at a farm in Jiangsu Province, and the incidence is about 50%. The pathologic tissues such as heart and liver were collected from the diseased chickens. For FAdV4 PCR detection, the result was positive. I isolate the virus by inoculation treated tissue materials to SPF chicken embryo, and collect the chicken embryo allantoic fluid for FAdV4 PCR detection, the result was also positive. I named the virus that isolated from SPF chicken embryo as avian adenovirus strain JS2016. The isolated virus showed no hemagglutination activity. Amplification of the isolated JS2016 strain Hexon gene, the results of sequence analysis showed that the homology of this strain was 98% with the avian adenovirus serotype 4 strains at domestic and abroad. Indicating that the virus that isolated from the chickens expressed hydropericadium syndrome was the avian adenovirus group I serotype 4. This study paved a way for the future vaccine development and pathogenicity exploring of FAdV4.
Key words: Angara disease; Avian adenovirus type 4; JS2016 strain; Isolation; Identification
引言
自2015年6月以来，中国河南、山东、河北、辽宁、安徽、吉林等省的部分地区鸡群发生了以心包积水、肝脏肿大为特征的心包积水综合征[13]。该病主要发生于3~6周龄的肉鸡，后备母鸡和蛋鸡也偶有发生，病程8~15天，病死率达20%~60%。
禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAdV）属于腺病毒科禽腺病毒属，根据其群特异性抗原的不同，禽腺病毒可分为I、II和III 3个群。I群禽腺病毒具有共同的群抗原，II群禽腺病毒与I群禽腺病毒基本无抗原相关性，III群禽腺病毒与I群禽腺病毒只含有部分共同抗原[46]。根据限制性酶切图谱以及血清交叉中和反应的特点，可将禽腺病毒分为5个基因（A~E），12个血清型（FAV1~12）。I群禽腺病毒的代表株有：禽包涵体肝炎（IBH）、肌胃糜烂和溃疡（GEU）、心包积水综合征（HPS）等；II群禽腺病毒代表株有：火鸡出血性肠炎病毒（HEV）、雄鸡大理石脾病毒（MSDV）、禽类脾肿大病毒（AASV）等；III群禽腺病毒只有唯一一个代表株：减蛋综合征（EDV）。其中I群FAdV中C种FAdV4型认为是引起鸡心包积水综合征的主要病原之一[7]。
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