体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命及繁殖力的影响
：[目的]本实验旨在研究体外消化的动物肌肉蛋白对黑腹果蝇寿命和繁殖力的影响。[方法]配制不同浓度的含鸡胸肉和猪里脊肉体外消化液培养基（0%、1%鸡肉、10%鸡肉、1%猪肉、10%猪肉），供黑腹果蝇自由啜食。寿命实验组，每天计录果蝇的死亡数直至全部果蝇死亡，计算果蝇的平均寿命和最高寿命；繁殖力实验组，亲本果蝇接入7d后去除，连续统计21d新生成蝇的数目。[结果]加入肉样消化液的培养基饲养的果蝇寿命呈下降趋势；随着消化液浓度的增大，果蝇的繁殖力呈现上升的趋势，并呈现剂量--效应关系，差异显著P<0.05。[结论]体外消化的鸡肉蛋白和猪肉蛋白有提高果蝇繁殖力的作用。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料4
1.1.1 实验动物4
1.1.2 仪器4
1.1.3 试剂4
1.2方法 4
1.2.1基础培养基的配制4
1.2.2 体外消化动物肌肉蛋白4
1.2.3体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响5
1.2.4体外消化动物肌肉蛋白对果蝇繁殖力的影响5
2结果与分析5
2.1体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响5
2.1.1体外消化动物肌肉蛋白对果蝇平均寿命的影响5
2.1.2体外消化动物肌肉蛋白对果蝇最高寿命的影响6
2.2体外消化动物肌肉蛋白对果蝇繁殖力的影响7
3 讨论 7
致谢9
参考文献9
体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命及繁殖力的影响
引言
肉和肉制品是人类营养的重要来源，是优质蛋白质、脂肪、脂溶性维生素、B族维生素和矿物质的主要来源。不同的肉和肉制品中微量元素的含量是不同的。不同品种的肉类含有的营养成分相似，含有约20%蛋白质、1%至15%的脂肪、1%的无机盐，其余为水分。但是，同一动物不同部位的脂肪含量变化很大；脂肪含量也不同。里脊是猪肉和牛肉中最瘦的部位，而胸脯肉是禽肉中相应的脂肪含量最少的部位，皮下组织则是禽肉中最主要的脂肪来源
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
[1]。
肌肉蛋白一直以来是营养物质、甚至是生物功能特异性优质蛋白质的来源，其许多优点是其它食物难以取代的。它的营养特性与其氨基酸成分、生物利用率和消化过程中产生的功能活性肽息息相关 [2]。
蛋白质的消化包括咀嚼混合，进入胃腔的非特异性胃蛋白酶消化，和进入小肠，被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶为主的消化酶混合物系统进一步特异性降解。消化所产生的游离氨基酸和小肽由肠上皮细胞吸收进入血液为人体所用。未消化的蛋白质、肽和血红素铁等进入大肠，被肠道菌群进一步利用。体外模拟实验，即模拟消化道的pH值、温度、酶浓度、反应时间和其他环境，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶或其他蛋白酶对食物蛋白质进行消化法降解。在体外模拟实验中，可以准确地收集各个阶段的消化产物进行定性和定量，且易于控制实验条件。
果蝇具有体积小、生命周期短、繁殖力强、子代数量多、饲养简单、操作方便、成本低、易与表型分析等优点，已成为生物研究最重要的模式生物之一 [3]。二十世纪早期，摩根选择果蝇为研究对象，通过简单的杂交及子代表型计数，对染色体遗传理论的建立，奠定了经典遗传学的基础，开创了将果蝇作为模式生物的先例 [4]。由于果蝇的许多代谢途径、生理功能及发育阶段和哺乳动物具有高度的相似性，通常被用于生存与衰老实验的研究 [5]。
本课题以黑腹果蝇为实验对象，选择鸡胸肉和猪里脊肉为代表，于体外消化后配置含不同浓度消化液的培养基，研究体外消化动物肌肉蛋白与果蝇寿命和繁殖力之间的量效关系。
1 材料与方法（格式）
1．1 材料
1．1．1 实验动物 黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。
1．1．2 仪器 平底直型管、牛奶瓶、注射器、毛笔、镊子、烧杯、玻璃棒、分析天平、移液枪、GXZ300l智能型光照培养箱、影像测量仪、立式压力蒸汽灭菌等。
1. 1. 3 试剂 无水乙醚，丙酸，琼脂粉，高活性干酵母，玉米粉，绵白糖，去离子水等。
1．2 方法
1. 2. 1 基础培养基的配制
表1 基础培养基的配方
Table 1 Formulations of basal media
玉米粉
绵白糖
琼脂
丙酸
干酵母
去离子水
56.7g
43.3g
3.3g
2.7ml
1.7g
500ml
按配方量，将水烧开，加入绵白糖搅拌溶解；趁热缓慢加入玉米，缓慢搅拌至完全糊化，防止冒泡烫伤。将预先用冷水化开的琼脂，趁热加入，并搅拌，冷却至约37℃（手握烧杯壁不觉得烫为宜），加入用凉水化开的酵母。加入丙酸，加水至预定体积，在凝固之前分装至已灭菌的牛奶瓶或平底直型管中，尽量不要粘在管壁上即可。
1. 2. 2 体外消化动物肌肉蛋白
1. 2. 2. 1 提取脂肪 将肉中所有可见的脂肪和结缔组织去掉，切成小肉块，称重后冻干，用研钵研磨成粉，称取2g用滤纸包住，放入索氏抽提装置中，用乙醚提取脂肪，反复抽提12h。将滤纸包裹的肉样放入通风厨，使乙醚充分挥发。留取一部分肉样用于测定脂肪、粗蛋白、能量等指标。
1. 2. 2. 2 体外消化 将另一部分肉样转入10 ml离心管中，72℃水浴30min，加入1M HCl调节pH2.0，按体重比1:31.25加入胃蛋白酶，于37℃震荡消化2 h，加入1 M NaOH调节pH7.5终止消化，按体重比1:50加入胰蛋白酶，于37℃震荡消化2 h，95℃放置5 min终止消化。消化液加入三倍体积的乙醇4℃放置12 h去除未消化的蛋白质，3000g离心20min，取上清，冻干后用于后续试验分析。
1. 2. 2. 3 含不同浓度消化液培养基的配制 将处理好的消化液加入融化未凝固的基础培养基中，充分混匀分装于培养管中。按基础培养基中干物质量，计算应加的消化液的量，使培养基最终含消化液的百分比为：0%、1%、10% 3个不同浓度组，其中0%为对照组，分别供各浓度组的果蝇自由啜食。
1. 2. 3 体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响 将牛奶瓶中的羽化果蝇全部移到新的基础培养基中，将不含成虫果蝇的牛奶瓶，置于25℃、相对湿度约65%的自然光照的培养箱中继续孵化，收集89h内羽化的未交配过的处女果蝇，用乙醚麻醉后区分雌雄。培养基分5个处理组：空白组，1%鸡肉组，10%鸡肉组，1%猪肉组，10%猪肉组；每个浓度10管（5管雌性，5管雄性），每管15只果蝇。麻醉的果蝇依照对性别的要求随机分配到各管中，待果蝇苏醒后再立起直型管。置于25℃、相对湿度约65%的自然光照的培养箱中培养，每7d换一次新的培养基。每日观察记录各管果蝇的存活和死亡个数，直至全部死亡。计算每组的平均寿命和最高寿命。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料4
1.1.1 实验动物4
1.1.2 仪器4
1.1.3 试剂4
1.2方法 4
1.2.1基础培养基的配制4
1.2.2 体外消化动物肌肉蛋白4
1.2.3体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响5
1.2.4体外消化动物肌肉蛋白对果蝇繁殖力的影响5
2结果与分析5
2.1体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响5
2.1.1体外消化动物肌肉蛋白对果蝇平均寿命的影响5
2.1.2体外消化动物肌肉蛋白对果蝇最高寿命的影响6
2.2体外消化动物肌肉蛋白对果蝇繁殖力的影响7
3 讨论 7
致谢9
参考文献9
体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命及繁殖力的影响
引言
肉和肉制品是人类营养的重要来源，是优质蛋白质、脂肪、脂溶性维生素、B族维生素和矿物质的主要来源。不同的肉和肉制品中微量元素的含量是不同的。不同品种的肉类含有的营养成分相似，含有约20%蛋白质、1%至15%的脂肪、1%的无机盐，其余为水分。但是，同一动物不同部位的脂肪含量变化很大；脂肪含量也不同。里脊是猪肉和牛肉中最瘦的部位，而胸脯肉是禽肉中相应的脂肪含量最少的部位，皮下组织则是禽肉中最主要的脂肪来源
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
[1]。
肌肉蛋白一直以来是营养物质、甚至是生物功能特异性优质蛋白质的来源，其许多优点是其它食物难以取代的。它的营养特性与其氨基酸成分、生物利用率和消化过程中产生的功能活性肽息息相关 [2]。
蛋白质的消化包括咀嚼混合，进入胃腔的非特异性胃蛋白酶消化，和进入小肠，被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶为主的消化酶混合物系统进一步特异性降解。消化所产生的游离氨基酸和小肽由肠上皮细胞吸收进入血液为人体所用。未消化的蛋白质、肽和血红素铁等进入大肠，被肠道菌群进一步利用。体外模拟实验，即模拟消化道的pH值、温度、酶浓度、反应时间和其他环境，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶或其他蛋白酶对食物蛋白质进行消化法降解。在体外模拟实验中，可以准确地收集各个阶段的消化产物进行定性和定量，且易于控制实验条件。
果蝇具有体积小、生命周期短、繁殖力强、子代数量多、饲养简单、操作方便、成本低、易与表型分析等优点，已成为生物研究最重要的模式生物之一 [3]。二十世纪早期，摩根选择果蝇为研究对象，通过简单的杂交及子代表型计数，对染色体遗传理论的建立，奠定了经典遗传学的基础，开创了将果蝇作为模式生物的先例 [4]。由于果蝇的许多代谢途径、生理功能及发育阶段和哺乳动物具有高度的相似性，通常被用于生存与衰老实验的研究 [5]。
本课题以黑腹果蝇为实验对象，选择鸡胸肉和猪里脊肉为代表，于体外消化后配置含不同浓度消化液的培养基，研究体外消化动物肌肉蛋白与果蝇寿命和繁殖力之间的量效关系。
1 材料与方法（格式）
1．1 材料
1．1．1 实验动物 黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。
1．1．2 仪器 平底直型管、牛奶瓶、注射器、毛笔、镊子、烧杯、玻璃棒、分析天平、移液枪、GXZ300l智能型光照培养箱、影像测量仪、立式压力蒸汽灭菌等。
1. 1. 3 试剂 无水乙醚，丙酸，琼脂粉，高活性干酵母，玉米粉，绵白糖，去离子水等。
1．2 方法
1. 2. 1 基础培养基的配制
表1 基础培养基的配方
Table 1 Formulations of basal media
玉米粉
绵白糖
琼脂
丙酸
干酵母
去离子水
56.7g
43.3g
3.3g
2.7ml
1.7g
500ml
按配方量，将水烧开，加入绵白糖搅拌溶解；趁热缓慢加入玉米，缓慢搅拌至完全糊化，防止冒泡烫伤。将预先用冷水化开的琼脂，趁热加入，并搅拌，冷却至约37℃（手握烧杯壁不觉得烫为宜），加入用凉水化开的酵母。加入丙酸，加水至预定体积，在凝固之前分装至已灭菌的牛奶瓶或平底直型管中，尽量不要粘在管壁上即可。
1. 2. 2 体外消化动物肌肉蛋白
1. 2. 2. 1 提取脂肪 将肉中所有可见的脂肪和结缔组织去掉，切成小肉块，称重后冻干，用研钵研磨成粉，称取2g用滤纸包住，放入索氏抽提装置中，用乙醚提取脂肪，反复抽提12h。将滤纸包裹的肉样放入通风厨，使乙醚充分挥发。留取一部分肉样用于测定脂肪、粗蛋白、能量等指标。
1. 2. 2. 2 体外消化 将另一部分肉样转入10 ml离心管中，72℃水浴30min，加入1M HCl调节pH2.0，按体重比1:31.25加入胃蛋白酶，于37℃震荡消化2 h，加入1 M NaOH调节pH7.5终止消化，按体重比1:50加入胰蛋白酶，于37℃震荡消化2 h，95℃放置5 min终止消化。消化液加入三倍体积的乙醇4℃放置12 h去除未消化的蛋白质，3000g离心20min，取上清，冻干后用于后续试验分析。
1. 2. 2. 3 含不同浓度消化液培养基的配制 将处理好的消化液加入融化未凝固的基础培养基中，充分混匀分装于培养管中。按基础培养基中干物质量，计算应加的消化液的量，使培养基最终含消化液的百分比为：0%、1%、10% 3个不同浓度组，其中0%为对照组，分别供各浓度组的果蝇自由啜食。
1. 2. 3 体外消化动物肌肉蛋白对果蝇寿命的影响 将牛奶瓶中的羽化果蝇全部移到新的基础培养基中，将不含成虫果蝇的牛奶瓶，置于25℃、相对湿度约65%的自然光照的培养箱中继续孵化，收集89h内羽化的未交配过的处女果蝇，用乙醚麻醉后区分雌雄。培养基分5个处理组：空白组，1%鸡肉组，10%鸡肉组，1%猪肉组，10%猪肉组；每个浓度10管（5管雌性，5管雄性），每管15只果蝇。麻醉的果蝇依照对性别的要求随机分配到各管中，待果蝇苏醒后再立起直型管。置于25℃、相对湿度约65%的自然光照的培养箱中培养，每7d换一次新的培养基。每日观察记录各管果蝇的存活和死亡个数，直至全部死亡。计算每组的平均寿命和最高寿命。
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