大鼠子宫炎症模型的建立
奶牛子宫内膜炎是危害奶牛养殖业发展的主要疾病之一，该病发病率较高。人工授精次数的增多，配种和受孕间隔的延长[1]，使得患病奶牛妊娠率、受孕率降低；严重影响奶牛的泌乳量，增加饲养成本及淘汰率，使奶牛养殖业蒙受巨大的经济损失。虽然国外学者一直对奶牛子宫内膜炎进行研究，但是仅局限于小量样本的临床观察，这是由于奶牛经济价值相对较为昂贵。此外，目前尚缺乏经济的、公认的子宫内膜炎模型动物，也严重制约了对该病预防与治疗的深入研究。本研究使用手术法，将奶牛子宫内膜炎常见致病菌（金黄色葡萄球菌、E.coli大肠杆菌）直接感染大鼠，并造成机械性损伤，致使大鼠出现子宫炎症，以期建立合适、方便、经济的动物病理模型。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1造模动物与饲养环境2
1.2实验菌种2
1.3仪器与易耗品2
1.4实验分组与试验方法2
1.4.1药物麻醉3
1.4.2 手术3
1.4.3 接种病原菌3
2 样品的采集3
2.1 子宫组织块采集3
2.2大鼠子宫组织病理切片的制作与观察3
2.2.1组织包埋及切片3
2.2.2 HE染色4
3结果与分析4
3.1手术前后大鼠身体状态比较4
3.2病理剖检观察4
3.3 子宫指数计算统计结果5
3.4 病理组织切片观察结果 5
讨论 6
4.1 大鼠手术麻醉药的选择及发情间期判定6
4.2大鼠子宫内膜炎模型的建立6
致谢6
参考文献6
大鼠子宫炎症模型的建立
动物科技学院 黄帅奇
引言
子宫内膜炎是奶牛产后一类繁殖疾病，严重影响奶牛泌乳量，产读数量等生产指标。但是利用奶牛来研究子宫内膜炎的发病机制，容易对奶牛子宫造成进一步损伤，影响生产，所以通过模式动物构建动物模型，在节约成本的同时掌握相关数据和指标，为预防和治疗子宫内膜炎 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
提供理论性依据。子宫内膜炎常用造模动物是大鼠、兔子等 [2]。动物模型的构建方法包括子宫灌注法和腹腔手术法[3]，是否建模成功通过实验动物的临床症状、致病菌的分离与鉴定、子宫指数的差异性比较、子宫组织的病理学观察和指标来进行评价[4]。本实验将采用腹腔手术法，通过人造机械损伤和致病菌的感染来以期对大鼠子宫内膜炎病症实现造模，再通过对大鼠的临床症状、子宫外观和病理切片等的观察来判断造模大鼠是否发生感染而患上子宫内膜炎，从而判定造模是否成功。
1 材料与方法
造模动物与饲养环境
本实验动物购自青龙山实验动物繁殖厂，实验采用SPF级78周龄SD大鼠，体重为180220g。实验室卫生环境符合清洁级动物实验室要求。保持在2025℃，通风，清洁安静，自由采食和饮水，自然光照，大鼠采用标准饲料饲养，自由摄食，适应饲养5天后使用，动物分笼饲养，每笼2只。观察大鼠发情表现、外阴发情征状，选择发情间期的大鼠用于建模实验。
实验菌种：
本研究采用的大肠杆菌菌种是经本实验室自行分离，从产后21±3d具有典型临床子宫内膜炎症状的奶牛子宫内容物中分离纯化得到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。经过分离纯化镜检和血清型鉴定，最终确定为大肠杆菌菌株和金黄色葡萄球菌。
取营养肉汤培养基0.88g溶于40mL蒸馏水中，转入盐水瓶，121℃高压灭菌15min，转入超净台，分装入10mL灭菌离心管中，待冷却后接种10μL大肠杆菌菌液至灭菌营养肉汤，空白营养肉汤作对照，37℃摇床培养10 h后，4℃保存备用。
仪器与易耗品：
仪器：生化培养箱、落地式培养摇床、20℃低温冰箱、显微镜、手术器械、干燥箱、高压蒸汽灭菌器、水浴锅、切片机、试管、培养皿、手术台、电热恒温干燥箱、电子天秤、显微镜、移液枪、高压灭菌锅
易耗品：一次性注射器（1mL）、一次性橡胶手套、盖玻片、医用棉签、解剖器械（由本实验室提供）、HE常规染色剂由本实验室配置、10%福尔马林固定液、缝针、医用缝线实验室自备。
试验分组与试验方法
本试验分为3个处理组，分别为对照组，SA处理组，E.coli处理组，利用手术法建立大鼠子宫内膜炎模型。手术操作严格遵守无菌原则。完成建立大鼠子宫炎症手术前，将手术器械用新洁尔灭消毒水浸泡20 min之后，再用无菌生理盐水清洗，之后用纱布擦净使用。术后腹腔灌入青霉素钠以预防感染。表皮伤口涂上鱼石脂，以加速伤口愈合。
药物麻醉：本手术实验采用新配制的1%戊巴比妥钠作为术前麻醉用药，经过预实验探索和筛选，最终确定0.4ml/100g为最适的注射剂量，进行腹腔注射。大鼠从注入1%戊巴比妥钠注射液到全身麻醉约需4~5min,麻醉持续时长可以达到40~50min，如大鼠在手术过程中出现苏醒迹象，补充注射原剂量四分之一的戊巴比妥钠[5]。
手术：当大鼠处于全身麻醉状态后，将大鼠进行绑定在手术台上，然后剔除腹部的毛发，进行无菌剖腹术。按照消毒顺序，先进行酒精消毒、其次碘酒消毒、最后酒精脱碘的过程，术前备皮、消毒、铺巾。接下来进行腹腔切开的手术，在腹正中线偏左切口，距离会阴门约2cm腹中线偏左的位置，向会阴门剪开约1.5 cm的术口，朝左侧分离膀胱，朝右侧分离肠系膜和脂肪组织，暴露出子宫，即可看到呈Y字型子宫，此时用小镊子牵拉子宫角至术口外[6]。
接种病原菌：金黄色葡萄球菌(SA)组注射浓度为1x109CFU的金黄色葡萄球菌，大肠杆菌(E.coli)组注射浓度为1x109CFU的大肠杆菌，对照组注射相同剂量的灭菌生理盐水，具体方法为：从子宫角结合部进针向卵巢方向刺入，在刺入过程中以螺旋形或反复进针的方法，造成子宫内膜机械损伤。之后分别注入各组菌液。感染完成后，矫正膀胱和子宫的位置。连续螺旋缝合浆膜层和肌层，涂撒少量青霉素钠粉剂，结节缝合皮肤层，缝合完毕后碘酊棉涂擦，每日消毒一次。恢复饮水，正常清洁饲养。
样品采集
子宫组织块采集：正常饲喂24h后脱颈椎处死，屠宰前称重后剖检，记录大体剖检病变，分离大鼠子宫并计算子宫指数，子宫指数=（子宫湿质量/动物体质量）×100。
2.2 大鼠子宫组织病理切片的制作与观察
子宫组织标本的采集与标本的固定：造模24h后，将麻醉后的大鼠进行开腹手术，取出子宫，观察子宫外观的变化，截取子宫角横断面组织块1cm左右长度，立即放置于用装有10 %福尔马林溶液的10ml EP管中固定，48h后取出，用作制作病理组织切片。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1造模动物与饲养环境2
1.2实验菌种2
1.3仪器与易耗品2
1.4实验分组与试验方法2
1.4.1药物麻醉3
1.4.2 手术3
1.4.3 接种病原菌3
2 样品的采集3
2.1 子宫组织块采集3
2.2大鼠子宫组织病理切片的制作与观察3
2.2.1组织包埋及切片3
2.2.2 HE染色4
3结果与分析4
3.1手术前后大鼠身体状态比较4
3.2病理剖检观察4
3.3 子宫指数计算统计结果5
3.4 病理组织切片观察结果 5
讨论 6
4.1 大鼠手术麻醉药的选择及发情间期判定6
4.2大鼠子宫内膜炎模型的建立6
致谢6
参考文献6
大鼠子宫炎症模型的建立
动物科技学院 黄帅奇
引言
子宫内膜炎是奶牛产后一类繁殖疾病，严重影响奶牛泌乳量，产读数量等生产指标。但是利用奶牛来研究子宫内膜炎的发病机制，容易对奶牛子宫造成进一步损伤，影响生产，所以通过模式动物构建动物模型，在节约成本的同时掌握相关数据和指标，为预防和治疗子宫内膜炎 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
提供理论性依据。子宫内膜炎常用造模动物是大鼠、兔子等 [2]。动物模型的构建方法包括子宫灌注法和腹腔手术法[3]，是否建模成功通过实验动物的临床症状、致病菌的分离与鉴定、子宫指数的差异性比较、子宫组织的病理学观察和指标来进行评价[4]。本实验将采用腹腔手术法，通过人造机械损伤和致病菌的感染来以期对大鼠子宫内膜炎病症实现造模，再通过对大鼠的临床症状、子宫外观和病理切片等的观察来判断造模大鼠是否发生感染而患上子宫内膜炎，从而判定造模是否成功。
1 材料与方法
造模动物与饲养环境
本实验动物购自青龙山实验动物繁殖厂，实验采用SPF级78周龄SD大鼠，体重为180220g。实验室卫生环境符合清洁级动物实验室要求。保持在2025℃，通风，清洁安静，自由采食和饮水，自然光照，大鼠采用标准饲料饲养，自由摄食，适应饲养5天后使用，动物分笼饲养，每笼2只。观察大鼠发情表现、外阴发情征状，选择发情间期的大鼠用于建模实验。
实验菌种：
本研究采用的大肠杆菌菌种是经本实验室自行分离，从产后21±3d具有典型临床子宫内膜炎症状的奶牛子宫内容物中分离纯化得到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。经过分离纯化镜检和血清型鉴定，最终确定为大肠杆菌菌株和金黄色葡萄球菌。
取营养肉汤培养基0.88g溶于40mL蒸馏水中，转入盐水瓶，121℃高压灭菌15min，转入超净台，分装入10mL灭菌离心管中，待冷却后接种10μL大肠杆菌菌液至灭菌营养肉汤，空白营养肉汤作对照，37℃摇床培养10 h后，4℃保存备用。
仪器与易耗品：
仪器：生化培养箱、落地式培养摇床、20℃低温冰箱、显微镜、手术器械、干燥箱、高压蒸汽灭菌器、水浴锅、切片机、试管、培养皿、手术台、电热恒温干燥箱、电子天秤、显微镜、移液枪、高压灭菌锅
易耗品：一次性注射器（1mL）、一次性橡胶手套、盖玻片、医用棉签、解剖器械（由本实验室提供）、HE常规染色剂由本实验室配置、10%福尔马林固定液、缝针、医用缝线实验室自备。
试验分组与试验方法
本试验分为3个处理组，分别为对照组，SA处理组，E.coli处理组，利用手术法建立大鼠子宫内膜炎模型。手术操作严格遵守无菌原则。完成建立大鼠子宫炎症手术前，将手术器械用新洁尔灭消毒水浸泡20 min之后，再用无菌生理盐水清洗，之后用纱布擦净使用。术后腹腔灌入青霉素钠以预防感染。表皮伤口涂上鱼石脂，以加速伤口愈合。
药物麻醉：本手术实验采用新配制的1%戊巴比妥钠作为术前麻醉用药，经过预实验探索和筛选，最终确定0.4ml/100g为最适的注射剂量，进行腹腔注射。大鼠从注入1%戊巴比妥钠注射液到全身麻醉约需4~5min,麻醉持续时长可以达到40~50min，如大鼠在手术过程中出现苏醒迹象，补充注射原剂量四分之一的戊巴比妥钠[5]。
手术：当大鼠处于全身麻醉状态后，将大鼠进行绑定在手术台上，然后剔除腹部的毛发，进行无菌剖腹术。按照消毒顺序，先进行酒精消毒、其次碘酒消毒、最后酒精脱碘的过程，术前备皮、消毒、铺巾。接下来进行腹腔切开的手术，在腹正中线偏左切口，距离会阴门约2cm腹中线偏左的位置，向会阴门剪开约1.5 cm的术口，朝左侧分离膀胱，朝右侧分离肠系膜和脂肪组织，暴露出子宫，即可看到呈Y字型子宫，此时用小镊子牵拉子宫角至术口外[6]。
接种病原菌：金黄色葡萄球菌(SA)组注射浓度为1x109CFU的金黄色葡萄球菌，大肠杆菌(E.coli)组注射浓度为1x109CFU的大肠杆菌，对照组注射相同剂量的灭菌生理盐水，具体方法为：从子宫角结合部进针向卵巢方向刺入，在刺入过程中以螺旋形或反复进针的方法，造成子宫内膜机械损伤。之后分别注入各组菌液。感染完成后，矫正膀胱和子宫的位置。连续螺旋缝合浆膜层和肌层，涂撒少量青霉素钠粉剂，结节缝合皮肤层，缝合完毕后碘酊棉涂擦，每日消毒一次。恢复饮水，正常清洁饲养。
样品采集
子宫组织块采集：正常饲喂24h后脱颈椎处死，屠宰前称重后剖检，记录大体剖检病变，分离大鼠子宫并计算子宫指数，子宫指数=（子宫湿质量/动物体质量）×100。
2.2 大鼠子宫组织病理切片的制作与观察
子宫组织标本的采集与标本的固定：造模24h后，将麻醉后的大鼠进行开腹手术，取出子宫，观察子宫外观的变化，截取子宫角横断面组织块1cm左右长度，立即放置于用装有10 %福尔马林溶液的10ml EP管中固定，48h后取出，用作制作病理组织切片。
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