正交试验优化超声辅助法提取黄芪中的总黄酮(附件)
摘 要本实验通过超声辅助法以黄芪根为原料，乙醇为提取剂，在单因素实验的基础上，通过正交试验对超声辅助法提取黄芪中总黄酮的工艺进行优化。其最佳工艺条件为：超声波提取温度为70℃，提取时间为25min,乙醇浓度为80%,提取功率为400W，最佳提取率为8.148%。目 录
1 概述
1.1 研究目的和意义 1
1.2 黄芪的概述 1
1.3 黄酮化合物的药理作用 2
1.3.1抗氧化、消除自由基作用 2
1.3.2免疫调节作用 3
1.3.3减轻血管内皮单层通透性增加作用 3
1.3.4抗病毒作用 3
1.3.5抗癌抗肿瘤的作用 4
1.3.6清除毒性代谢产物 4
1.4 总黄酮的提取方法 4
1.4.1超声波提取法 4
1.4.2微波提取法 5
1.4.3超临界流体萃取法 5
1.4.4酶法提取 5
2 实验部分
2.1 实验材料与仪器 6
2.2 标准溶剂的配制 7
2.2.1试剂配制 7
2.2.2波长的选择 7
2.2.3标准曲线的绘制 7
2.2.4重复性试验 8
2.2.5精密度试验 8
2.2.6黄芪总黄酮的提取工艺 8
2.3 单因素实验 8
2.3.1超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 8
2.3.2乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.3.3提取温度对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.3.4提取时间对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.4 正交试验 9
2.5 黄芪总黄酮的得率计算 9
3 实验结果与分析
3.1 芦丁标准曲线的绘制 10
3.2 单因素试验结果 10
3.2.1乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 10
3.2.2超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 11
3.2.3提
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间对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.4 正交试验 9
2.5 黄芪总黄酮的得率计算 9
3 实验结果与分析
3.1 芦丁标准曲线的绘制 10
3.2 单因素试验结果 10
3.2.1乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 10
3.2.2超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 11
3.2.3提取温度对黄芪总黄酮得率的影响 12
3.2.4提取时间对黄芪总黄酮得率的影响 12
3.3 正交试验结果 13
3.4 正交试验结果验证 14
3.5 总结 15
结论 17
参考文献 17
致谢 19
1 概述
1.1 研究目的和意义
本实验立足于对黄芪研究的同时，以黄芪总黄酮得率为指标，通过正交试验，优选最佳的提高黄芪中总黄酮产率的方案，从而来提高黄芪中总黄酮的提取率。
黄芪是多年生高大草本植物，属于豆科。它夏季开花，结荚果。黄芪根很长，一般采挖4年以上的根，除去地上茎叶及须根，晾干后截成一二尺长收藏或切片药用。晾干加工后的黄芪成圆柱形，有的有分枝，上端较粗。表面淡棕黄色或淡棕褐色，有的不整齐的纵皱纹或纵沟。质硬而韧，木部淡黄色，有的放射纹理和裂隙。黄芪属植物蒙古黄芪和膜荚黄芪，其干燥后的根即为人所熟知的黄芪，是一种传统的中药材。黄芪味甘、性微温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、敛疮生肌之功效，也具有提高免疫功能、改善心功能和抗病毒、抗衰老、抗氧化等作用。在临床上可用于治疗冠心病、脑血管疾病、糖尿病、肝肾疾病等。这是因为黄芪含有多种生理活性成分，其中，黄芪中的黄酮类物质具有抗辐射损伤、清除氧自由基和增强免疫等功效。
1.2 黄芪的概述
黄芪，又名绵芪、百本、血参、蜀脂、人衔、百药棉黄参等。我国药典[1]规定，黄芪属植物膜荚黄芪和蒙古黄芪，其味甘、性微温，归肺、脾经，具有利尿排毒、补气固表、排脓、敛疮生肌之功效。黄芪的土根肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50100厘米。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地[2]。
建国前,黄芪的用途主要为中医临床调剂,在这段时间内黄芪以饮片的剂型用于医药行业,随着中成药工业的迅速发展,黄芪的用途也发生了翻天覆地的变化,它成为了中成药和保健品的主要原料,对药材的外观和切片要求相对于之前有所降低,只要其中的某些化学成分达到药典规定值即可投料,因此许多引种栽培品也有较大的市场需求,还有一些以黄芪中有效部位研制的天然药物种类,如黄芪多糖冻干粉针、黄芪皂苷注射剂(正在临床实验阶段)等,因确定了其中的药效成分,对原料药材的选用要求已不再以传统外观性状为主；另有海外市场和国内食疗养生的兴起,回归传统道地黄芪为原料的礼品芪,如山西炮台芪、冲正芪、斜切片、纵切人片芪等,正逐渐形成需求上升趋势。
黄芪作为传统中药的一种，在我国已有两千多年的药用历史。其主要的有效成分有黄酮、皂苷、多糖、氨基酸、微量元素和亚麻酸、亚油酸、谷甾醇、叶酸等。其中黄酮类成分经现代医学研究表明其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。但表实邪盛，气滞湿阻，食积停滞，痈疽初起或溃后热毒尚盛等实证，以及阴虚阳亢者，均须禁服[2]。为了更加充分合理利用黄芪中黄酮资源，提高其使用价值，进一步探索其构效关系，本文将对黄芪中黄酮的提取工艺进行研究。这不仅对黄芪中黄酮的实际生产具有重要意义，还对天然产物化学理论研究具有一定的现实意义[3]。
本文主要是研究黄芪黄酮的提取工艺，目的是优选出黄芪中黄酮类物质超声辅助提取的最佳工艺条件。提高黄芪黄酮的产率和提取效率，降低黄芪黄酮的开发成本。
1.3 黄芪中黄酮类化合物的药理作用
黄芪是中医补气要药,具有益气补中、利尿托毒等作用,在临床有广泛的应用。而黄酮类化合物是其主要的有效成分之一,具有多种生理功效，现就近几年来对黄芪中有关黄酮类化合物的药理作用研究情况作一概述。
1.3.1 抗氧化、消除自由基作用
自由基是一类在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子,病理情况下，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足,可引起氧化应激反应,导致细胞损伤甚至死亡。国内对中药黄芪清除自由基、减轻氧化应激损伤的作用机制十分重视,而且对其有效成分黄酮类化合物也进行了研究。汪德清等[4]用扑热息痛给小鼠灌胃，实验表明黄芪总黄酮(TFA)具有
1 概述
1.1 研究目的和意义 1
1.2 黄芪的概述 1
1.3 黄酮化合物的药理作用 2
1.3.1抗氧化、消除自由基作用 2
1.3.2免疫调节作用 3
1.3.3减轻血管内皮单层通透性增加作用 3
1.3.4抗病毒作用 3
1.3.5抗癌抗肿瘤的作用 4
1.3.6清除毒性代谢产物 4
1.4 总黄酮的提取方法 4
1.4.1超声波提取法 4
1.4.2微波提取法 5
1.4.3超临界流体萃取法 5
1.4.4酶法提取 5
2 实验部分
2.1 实验材料与仪器 6
2.2 标准溶剂的配制 7
2.2.1试剂配制 7
2.2.2波长的选择 7
2.2.3标准曲线的绘制 7
2.2.4重复性试验 8
2.2.5精密度试验 8
2.2.6黄芪总黄酮的提取工艺 8
2.3 单因素实验 8
2.3.1超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 8
2.3.2乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.3.3提取温度对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.3.4提取时间对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.4 正交试验 9
2.5 黄芪总黄酮的得率计算 9
3 实验结果与分析
3.1 芦丁标准曲线的绘制 10
3.2 单因素试验结果 10
3.2.1乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 10
3.2.2超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 11
3.2.3提
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
间对黄芪总黄酮得率的影响 9
2.4 正交试验 9
2.5 黄芪总黄酮的得率计算 9
3 实验结果与分析
3.1 芦丁标准曲线的绘制 10
3.2 单因素试验结果 10
3.2.1乙醇浓度对黄芪总黄酮得率的影响 10
3.2.2超声功率对黄芪总黄酮得率的影响 11
3.2.3提取温度对黄芪总黄酮得率的影响 12
3.2.4提取时间对黄芪总黄酮得率的影响 12
3.3 正交试验结果 13
3.4 正交试验结果验证 14
3.5 总结 15
结论 17
参考文献 17
致谢 19
1 概述
1.1 研究目的和意义
本实验立足于对黄芪研究的同时，以黄芪总黄酮得率为指标，通过正交试验，优选最佳的提高黄芪中总黄酮产率的方案，从而来提高黄芪中总黄酮的提取率。
黄芪是多年生高大草本植物，属于豆科。它夏季开花，结荚果。黄芪根很长，一般采挖4年以上的根，除去地上茎叶及须根，晾干后截成一二尺长收藏或切片药用。晾干加工后的黄芪成圆柱形，有的有分枝，上端较粗。表面淡棕黄色或淡棕褐色，有的不整齐的纵皱纹或纵沟。质硬而韧，木部淡黄色，有的放射纹理和裂隙。黄芪属植物蒙古黄芪和膜荚黄芪，其干燥后的根即为人所熟知的黄芪，是一种传统的中药材。黄芪味甘、性微温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿脱毒、敛疮生肌之功效，也具有提高免疫功能、改善心功能和抗病毒、抗衰老、抗氧化等作用。在临床上可用于治疗冠心病、脑血管疾病、糖尿病、肝肾疾病等。这是因为黄芪含有多种生理活性成分，其中，黄芪中的黄酮类物质具有抗辐射损伤、清除氧自由基和增强免疫等功效。
1.2 黄芪的概述
黄芪，又名绵芪、百本、血参、蜀脂、人衔、百药棉黄参等。我国药典[1]规定，黄芪属植物膜荚黄芪和蒙古黄芪，其味甘、性微温，归肺、脾经，具有利尿排毒、补气固表、排脓、敛疮生肌之功效。黄芪的土根肥厚，木质，常分枝，灰白色。茎直立，上部多分枝，有细棱，被白色柔毛。多年生草本，高50100厘米。产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地[2]。
建国前,黄芪的用途主要为中医临床调剂,在这段时间内黄芪以饮片的剂型用于医药行业,随着中成药工业的迅速发展,黄芪的用途也发生了翻天覆地的变化,它成为了中成药和保健品的主要原料,对药材的外观和切片要求相对于之前有所降低,只要其中的某些化学成分达到药典规定值即可投料,因此许多引种栽培品也有较大的市场需求,还有一些以黄芪中有效部位研制的天然药物种类,如黄芪多糖冻干粉针、黄芪皂苷注射剂(正在临床实验阶段)等,因确定了其中的药效成分,对原料药材的选用要求已不再以传统外观性状为主；另有海外市场和国内食疗养生的兴起,回归传统道地黄芪为原料的礼品芪,如山西炮台芪、冲正芪、斜切片、纵切人片芪等,正逐渐形成需求上升趋势。
黄芪作为传统中药的一种，在我国已有两千多年的药用历史。其主要的有效成分有黄酮、皂苷、多糖、氨基酸、微量元素和亚麻酸、亚油酸、谷甾醇、叶酸等。其中黄酮类成分经现代医学研究表明其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。但表实邪盛，气滞湿阻，食积停滞，痈疽初起或溃后热毒尚盛等实证，以及阴虚阳亢者，均须禁服[2]。为了更加充分合理利用黄芪中黄酮资源，提高其使用价值，进一步探索其构效关系，本文将对黄芪中黄酮的提取工艺进行研究。这不仅对黄芪中黄酮的实际生产具有重要意义，还对天然产物化学理论研究具有一定的现实意义[3]。
本文主要是研究黄芪黄酮的提取工艺，目的是优选出黄芪中黄酮类物质超声辅助提取的最佳工艺条件。提高黄芪黄酮的产率和提取效率，降低黄芪黄酮的开发成本。
1.3 黄芪中黄酮类化合物的药理作用
黄芪是中医补气要药,具有益气补中、利尿托毒等作用,在临床有广泛的应用。而黄酮类化合物是其主要的有效成分之一,具有多种生理功效，现就近几年来对黄芪中有关黄酮类化合物的药理作用研究情况作一概述。
1.3.1 抗氧化、消除自由基作用
自由基是一类在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子,病理情况下，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足,可引起氧化应激反应,导致细胞损伤甚至死亡。国内对中药黄芪清除自由基、减轻氧化应激损伤的作用机制十分重视,而且对其有效成分黄酮类化合物也进行了研究。汪德清等[4]用扑热息痛给小鼠灌胃，实验表明黄芪总黄酮(TFA)具有
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