连翘总黄酮提取物的工艺筛选研究
摘 要以连翘［Forsythiae suspentsa（Thunb)Vahl.)为试材，采用单因素试验法，研究提取温度、 提取时间、料液比、超声功率和乙醇浓度对连翘总黄酮提取率的影响。优选超声波辅助有机溶剂乙醇提取连翘总黄酮的工艺参数，采用正交试验法对提取温度、提取时间、料液比、超声功率和乙醇浓度进行正交试验，再结合单因素实验对连翘总黄酮提取率影响结果，以确定最佳提取条件。最佳提取工艺为温度50℃，提取时间30min，料液比1:10,乙醇浓度70%。在此条件下，理论提取率为1.080，该结果对于更好地开发利用连翘总黄酮有重要的实践意义。
目 录
1 绪论 8
1.1 连翘的概述 8
1.2 连翘中的化学成分 9
1.2.1 挥发性成分 9
1.2.2 连翘酯苷类 10
1.2.3 三萜类 10
1.2.4 酚酸类 10
1.2.5 其他 10
1.3 黄酮类化合物的药理作用 10
1.3.1 抗肿瘤 10
1.3.2 抗心脑血管疾病 11
1.3.3 抗炎镇痛作用? 11
1.3.4 免疫调节作用 11
1.3.5 抗氧化抗衰老? 11
1.4 黄酮类化合物的应用 11
1.5 总黄酮提取工艺 12
1.5.1 样品的前处理 12
1.5.2 提取溶剂的选择 12
1.5.3 溶剂提取法 12
1.5.4 超声提取法 13
1.5.5 微波萃取法 13
1.5.6 酶萃取技术 14
2 实验部分 14
2.1 材料 14
2.2 试剂 15
2.3 仪器设备 15
2.4 样品溶液的制备 15
2.5 对照品溶液的配制 15
2.6 标准曲线的制备 15
2.7 方法学考察 16
2.7.1 测定波长的选择 16
2.7.2 精密度试验 16
2.7.3 稳定性试验 17
2.7.4 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
回收率试验 17
2.8 单因素试验设计 17
2.9 正交实验设计 17
3 实验结果 19
3.1 单因素试验结果与分析 19
3.1.1 提取温度对连翘中黄酮提取率的影响 19
3.1.2 提取时间对连翘中黄酮提取率的影响 20
3.1.3 料液比对连翘中黄酮提取率的影响 21
3.1.4 乙醇浓度对连翘中黄酮提取率的影响 21
3.1.5 讨论与分析 22
小 结 22
参考文献 23
致 谢 24 1 绪论
1.1 连翘的概述
连翘始载于《神农本草经》，列为下品。寇宗奭谓：“太山山谷间甚多，其子折之，片片相比如翘，应以此得名耳。”苏恭谓：“此物有两种：大翘，小翘。大翘生于湿地，叶狭长如水苏，花黄可爱，着子似椿实之未开者，作房翘出众草，其小翘生于冈原之上，叶花实似大翘而小细。”连翘为木樨科连翘属植物连翘的干燥果实，味苦，性微寒[1]，具有清热解毒、疏散风热、消痈散结[2]、强心利尿和降血压之功效[3]，临床用于痈肿疮毒、急性风热感冒、淋巴结核、尿路感染等症[4]。主产于河北、山西、陕西、山东、安徽西部、河南、湖北、四川。生山坡灌丛、林下或草丛中，或山谷、山沟疏林中，海拔2502200米。药用分青翘、老翘两种。青翘在9月上旬，果皮呈青色尚未成熟时采下，置沸水中稍煮片刻或放蒸笼内蒸约0.5h，取出晒干。老翘在10上旬果实熟透变黄，果壳裂开时采收，晒干，筛去种子及杂质。我国山西、河南、陕西、山东等省[5]木樨科连翘从宋代开始沿用至今，已经成为连翘的主流商品[6]。
相传，五千年前岐伯在这里采药、种药，岐伯有个孙女叫连翘，一日岐伯和孙女连翘在山上采药时，岐伯自品自验一种药物，不幸中毒，口吐白沫，神昏脑胀，双目直视，不省人事，在病情十分严重的情况下，嘴里不停地喊着：连翘、连翘，连翘看爷爷中毒严重，有生命危险，泪流满面的抱着爷爷哭喊着：救命！救命！连翘呼喊了好久无人应答，心急之下她虽无抢救办法，也不忍心看着爷爷离去，无奈之下，她急中生智顺手捋了一把身边的绿叶，在手里揉碎后塞进爷爷的嘴里。稍过片刻，岐伯慢慢苏醒过来，把绿叶咽下肚里，两刻之后，岐伯面舌如常，连翘搀扶着爷爷回到家里，进行药物和膳食的调养，岐伯仙师逐渐恢复健康。从此，他开始研究起这绿叶来，经过多次试验，发现这绿叶有较好的清热解毒作用，效果甚佳，便把这绿叶记入他的中药名录，取名为连翘，以孙女代名，又在他居住的大臣沟里栽种了许多连翘，故事流传至今。
黄酮类化合物是自然界中广泛分布的一类天然产物，几乎每种植物都含有此类成分，它是药用植物中的主要活性成分之一。近几年来，连翘提取物广泛用于保健品、食品防腐等领域，在日本已将连翘果实应用于食品保鲜工业。另外，有医学研究证明，连翘中的黄酮类化合物使连翘表现出了很高的抗氧化活性 ，进一步提高了连翘的利用价值。黄酮类化合物作为药用植物的有效成分之一，在临床上已被证明具有多种生理活性。如镇痛、抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、抗艾滋病等，尤其在防止心血管系统疾病方面发挥着重要作用。研究表明，天然黄酮类化合物是一类安全可靠、成本低、来源广、具有强抗氧化活性的抗氧化剂。所以提取出具有较高生物活性的黄酮类化合物对医药及食品行业是十分重要的[7]。目前，从天然物质中提取黄酮类化合物的方法以溶剂热浸提为主，该法仅限于提取黄酮苷类和具有强极性取代基的黄酮类化合物。国内外利用微波法提取连翘黄酮类化合物的报道较少。目前微波提取技术应用于提取黄酮类化合物的报道有很多。而用超声波提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。超声波具有“空化现象”、“机械振动”以及“热效应等特性，可以使植物膨胀和水化，并使可溶性成分通过扩散和传递向溶剂中传递，大大缩短了提取时间，从而极大地提高提取效率，节约提取成本，提高产品质量，是当前浸出提取溶剂中最具前途的技术之一，已被广泛应用到各种天然活性成分的提取中。
1.2 连翘中的化学成分
近5年来，从连翘中分得的化学成分主要有挥发油类、苯乙醇苷类、木脂素类和三萜类物质，从中分得的黄酮类物质较少，酚酸类物质则比之前较多。
1.2.1 挥发性成分
连翘中的挥发性成分含量很高，在连翘的种子连翘心中含量平均可达3.8%，而在自然界中含挥发油如此高的植物并不多见。2009从连翘花中鉴定出24种挥发油类成分，主要是侧柏烯、β水芹烯、β蒎烯、桉油精、3乙丙烯基5,5二甲基环戊烯、β月桂烯、水杨酸甲酯等。
1.2.2 连翘酯苷类
之前有报道连翘中含有大量的苯乙醇苷类成分，该类化合物是连翘中主要的活性成分主要有连翘酯苷A、连翘酯苷C、连翘酯苷D、泽丁香酚、β羟基泽丁香酚苷、连翘酯苷D和连翘酯苷E等。2008，从连翘果实中分离得到了一种新的苯乙醇苷类成分异连翘酯苷，它是连翘酯苷中α型鼠李糖构型转变为β型的连翘酯苷异构体。
目 录
1 绪论 8
1.1 连翘的概述 8
1.2 连翘中的化学成分 9
1.2.1 挥发性成分 9
1.2.2 连翘酯苷类 10
1.2.3 三萜类 10
1.2.4 酚酸类 10
1.2.5 其他 10
1.3 黄酮类化合物的药理作用 10
1.3.1 抗肿瘤 10
1.3.2 抗心脑血管疾病 11
1.3.3 抗炎镇痛作用? 11
1.3.4 免疫调节作用 11
1.3.5 抗氧化抗衰老? 11
1.4 黄酮类化合物的应用 11
1.5 总黄酮提取工艺 12
1.5.1 样品的前处理 12
1.5.2 提取溶剂的选择 12
1.5.3 溶剂提取法 12
1.5.4 超声提取法 13
1.5.5 微波萃取法 13
1.5.6 酶萃取技术 14
2 实验部分 14
2.1 材料 14
2.2 试剂 15
2.3 仪器设备 15
2.4 样品溶液的制备 15
2.5 对照品溶液的配制 15
2.6 标准曲线的制备 15
2.7 方法学考察 16
2.7.1 测定波长的选择 16
2.7.2 精密度试验 16
2.7.3 稳定性试验 17
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回收率试验 17
2.8 单因素试验设计 17
2.9 正交实验设计 17
3 实验结果 19
3.1 单因素试验结果与分析 19
3.1.1 提取温度对连翘中黄酮提取率的影响 19
3.1.2 提取时间对连翘中黄酮提取率的影响 20
3.1.3 料液比对连翘中黄酮提取率的影响 21
3.1.4 乙醇浓度对连翘中黄酮提取率的影响 21
3.1.5 讨论与分析 22
小 结 22
参考文献 23
致 谢 24 1 绪论
1.1 连翘的概述
连翘始载于《神农本草经》，列为下品。寇宗奭谓：“太山山谷间甚多，其子折之，片片相比如翘，应以此得名耳。”苏恭谓：“此物有两种：大翘，小翘。大翘生于湿地，叶狭长如水苏，花黄可爱，着子似椿实之未开者，作房翘出众草，其小翘生于冈原之上，叶花实似大翘而小细。”连翘为木樨科连翘属植物连翘的干燥果实，味苦，性微寒[1]，具有清热解毒、疏散风热、消痈散结[2]、强心利尿和降血压之功效[3]，临床用于痈肿疮毒、急性风热感冒、淋巴结核、尿路感染等症[4]。主产于河北、山西、陕西、山东、安徽西部、河南、湖北、四川。生山坡灌丛、林下或草丛中，或山谷、山沟疏林中，海拔2502200米。药用分青翘、老翘两种。青翘在9月上旬，果皮呈青色尚未成熟时采下，置沸水中稍煮片刻或放蒸笼内蒸约0.5h，取出晒干。老翘在10上旬果实熟透变黄，果壳裂开时采收，晒干，筛去种子及杂质。我国山西、河南、陕西、山东等省[5]木樨科连翘从宋代开始沿用至今，已经成为连翘的主流商品[6]。
相传，五千年前岐伯在这里采药、种药，岐伯有个孙女叫连翘，一日岐伯和孙女连翘在山上采药时，岐伯自品自验一种药物，不幸中毒，口吐白沫，神昏脑胀，双目直视，不省人事，在病情十分严重的情况下，嘴里不停地喊着：连翘、连翘，连翘看爷爷中毒严重，有生命危险，泪流满面的抱着爷爷哭喊着：救命！救命！连翘呼喊了好久无人应答，心急之下她虽无抢救办法，也不忍心看着爷爷离去，无奈之下，她急中生智顺手捋了一把身边的绿叶，在手里揉碎后塞进爷爷的嘴里。稍过片刻，岐伯慢慢苏醒过来，把绿叶咽下肚里，两刻之后，岐伯面舌如常，连翘搀扶着爷爷回到家里，进行药物和膳食的调养，岐伯仙师逐渐恢复健康。从此，他开始研究起这绿叶来，经过多次试验，发现这绿叶有较好的清热解毒作用，效果甚佳，便把这绿叶记入他的中药名录，取名为连翘，以孙女代名，又在他居住的大臣沟里栽种了许多连翘，故事流传至今。
黄酮类化合物是自然界中广泛分布的一类天然产物，几乎每种植物都含有此类成分，它是药用植物中的主要活性成分之一。近几年来，连翘提取物广泛用于保健品、食品防腐等领域，在日本已将连翘果实应用于食品保鲜工业。另外，有医学研究证明，连翘中的黄酮类化合物使连翘表现出了很高的抗氧化活性 ，进一步提高了连翘的利用价值。黄酮类化合物作为药用植物的有效成分之一，在临床上已被证明具有多种生理活性。如镇痛、抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、抗艾滋病等，尤其在防止心血管系统疾病方面发挥着重要作用。研究表明，天然黄酮类化合物是一类安全可靠、成本低、来源广、具有强抗氧化活性的抗氧化剂。所以提取出具有较高生物活性的黄酮类化合物对医药及食品行业是十分重要的[7]。目前，从天然物质中提取黄酮类化合物的方法以溶剂热浸提为主，该法仅限于提取黄酮苷类和具有强极性取代基的黄酮类化合物。国内外利用微波法提取连翘黄酮类化合物的报道较少。目前微波提取技术应用于提取黄酮类化合物的报道有很多。而用超声波提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。超声波具有“空化现象”、“机械振动”以及“热效应等特性，可以使植物膨胀和水化，并使可溶性成分通过扩散和传递向溶剂中传递，大大缩短了提取时间，从而极大地提高提取效率，节约提取成本，提高产品质量，是当前浸出提取溶剂中最具前途的技术之一，已被广泛应用到各种天然活性成分的提取中。
1.2 连翘中的化学成分
近5年来，从连翘中分得的化学成分主要有挥发油类、苯乙醇苷类、木脂素类和三萜类物质，从中分得的黄酮类物质较少，酚酸类物质则比之前较多。
1.2.1 挥发性成分
连翘中的挥发性成分含量很高，在连翘的种子连翘心中含量平均可达3.8%，而在自然界中含挥发油如此高的植物并不多见。2009从连翘花中鉴定出24种挥发油类成分，主要是侧柏烯、β水芹烯、β蒎烯、桉油精、3乙丙烯基5,5二甲基环戊烯、β月桂烯、水杨酸甲酯等。
1.2.2 连翘酯苷类
之前有报道连翘中含有大量的苯乙醇苷类成分，该类化合物是连翘中主要的活性成分主要有连翘酯苷A、连翘酯苷C、连翘酯苷D、泽丁香酚、β羟基泽丁香酚苷、连翘酯苷D和连翘酯苷E等。2008，从连翘果实中分离得到了一种新的苯乙醇苷类成分异连翘酯苷，它是连翘酯苷中α型鼠李糖构型转变为β型的连翘酯苷异构体。
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