n6amt基因和长链非编码rna在褐飞虱生殖发育中的功能分析
褐飞虱（Nilaparvata lugens）种群繁衍速度极快，繁殖量大，对水稻生产危害极大，是我国及许多东北亚、东南亚等国家和地区的重要水稻害虫。表观遗传修饰可在基因的核苷酸序列不发生变化的情况下调控生物体多种生命活动，是重要的基因调控途径。本论文克隆了褐飞 虱N6AMT基因全长,发现了大量的长链非编码RNA基因，通过表达谱分析和RNA干扰等方法研究了其在褐飞虱生殖中的功能，论文成果对理解褐飞虱的表观遗传调控具有重要意义，同时为褐飞虱防治策略提出了新的思路。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析2
1材料与方法 2
1.1主要试剂和仪器设备 2
1.2供试昆虫的饲养2
1.3总RNA的提取 2
1.4 cDNA的合成4
1.5 PCR反应5
1.6分子克隆5
1.7蛋白结构域分析7
1.8多序列比对分析7
1.9基因结构分析7
2 结果与分析8
2.1获得基因片段与验证8
2.2 cDNA全长克隆9
2.3 褐飞虱N6amt2序列分析10
3讨论13
第二章 褐飞虱不同翅形及发育阶段中N6amt2的表达分析 14
1材料与方法14
1.1主要试剂和仪器设备14
1.2 供试昆虫的饲养14
1.3 总RNA的提取14
1.4 cDNA的合成15
1.5 引物设计16
1.6 荧光定量PCR反应16
2 结果与分析17
2.1 N6amt2在褐飞虱不同发育阶段的表达分析17
3 讨论18
第三章 褐飞虱N6amt2的干扰分析19
1 材料与方法19
1.1供试昆虫的饲养19
1.2主要试剂和仪器设备19
1.3 褐飞虱若虫的mimics注射19
1.4 干扰后目的基因表达量检测 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
20
2 结果与分析20
2.1 干扰后N6amt2表达量分析20
2.2 N6amt2干扰后褐飞虱生殖力分析21
3 讨论22
第四章 褐飞虱长链非编码RNA的分析 23
1 材料与方法23
1.1 数据来源23
1.2 lncRNA预测及分析软件23
2 结果与分析23
2.1 lncRNA的发现23
2.2 lncRNA与褐飞虱生殖力的关系23
3 讨论24
参考文献25
致谢26
N6AMT基因和长链非编码RNA在褐飞虱生殖发育中的功能分析
引言
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析
1材料与方法
1.1主要试剂和仪器设备
1.1.1主要试剂
Trizol试剂，Invitrogen公司提供；
SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit, Clontech公司提供；
SV Total RNA Isolation System Kit, Wizard. SV Gel and PCR CleanUp System,Promega公司提供；
pGEMT easy体，Promega公司提供；
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)反转录酶、TaqDNA聚合酶、Markers,
Takara公司提供；
大肠杆菌感受态细胞Trans5α，南京百斯凯公司提供；
PCR引物合成和序列测序，南京金斯瑞公司提供；
其他试剂均为国产AR级（分析纯试剂）或进口分装AR级产品。
1.1.2主要仪器设备
PCR仪Mastercycler personal，德国Eppendorf公司提供；
梯度PCR仪PCR Thermal Cycler Dice，日本Takara公司提供；
HE120水平式核酸电泳仪，南京普阳科学仪器研究所提供；
凝胶成像仪一系统Gel Doc2000，美国BioRad公司提供；
NANODROP 1000核酸蛋白分析仪，美国Thermo公司提供；
Mirco21 R微量台式离心机，美国Thermo公司提供；
离心机Centrifuge 5424，德国Eppendorf公司提供；
恒温金属浴CHB100，杭州博日公司提供；
恒温振荡器ZAWY 200B，智诚公司提供；
涡旋混匀器，苏州捷美电子公司提供；
洁净工作台，上海博讯公司和上海苏净公司提供；
制冰机SIMF 124，日本SANYO公司提供；
超低温冰箱906，美国FORMA公司提供；
超纯水器ElIX10，美国millipore公司提供；
高温灭菌锅SS325，日本TOMY公司提供；
烘箱MC000712，美国MMM公司提供；
1.2供试昆虫的饲养
供实验用褐飞虱用水稻幼苗饲养在实验室养虫房内，控制温度为26±1摄氏度，湿度为70%到80%，光周期为16L:8D。采用无土栽培法种植水稻幼苗。每天用水壶浇适量的水，保持稻苗根部有合适的水量，待稻苗长至5cm左右可用于接种褐飞虱。每隔10天左右应将褐飞虱换入新的水稻苗盒中，确保其营养充足，迅速且大量地繁殖。
1.3总RNA的提取
1.3.1用于基因片段验证的总RNA提取
采用Trizol试剂进行总RNA提取，具体操作步骤如下:
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析2
1材料与方法 2
1.1主要试剂和仪器设备 2
1.2供试昆虫的饲养2
1.3总RNA的提取 2
1.4 cDNA的合成4
1.5 PCR反应5
1.6分子克隆5
1.7蛋白结构域分析7
1.8多序列比对分析7
1.9基因结构分析7
2 结果与分析8
2.1获得基因片段与验证8
2.2 cDNA全长克隆9
2.3 褐飞虱N6amt2序列分析10
3讨论13
第二章 褐飞虱不同翅形及发育阶段中N6amt2的表达分析 14
1材料与方法14
1.1主要试剂和仪器设备14
1.2 供试昆虫的饲养14
1.3 总RNA的提取14
1.4 cDNA的合成15
1.5 引物设计16
1.6 荧光定量PCR反应16
2 结果与分析17
2.1 N6amt2在褐飞虱不同发育阶段的表达分析17
3 讨论18
第三章 褐飞虱N6amt2的干扰分析19
1 材料与方法19
1.1供试昆虫的饲养19
1.2主要试剂和仪器设备19
1.3 褐飞虱若虫的mimics注射19
1.4 干扰后目的基因表达量检测 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
20
2 结果与分析20
2.1 干扰后N6amt2表达量分析20
2.2 N6amt2干扰后褐飞虱生殖力分析21
3 讨论22
第四章 褐飞虱长链非编码RNA的分析 23
1 材料与方法23
1.1 数据来源23
1.2 lncRNA预测及分析软件23
2 结果与分析23
2.1 lncRNA的发现23
2.2 lncRNA与褐飞虱生殖力的关系23
3 讨论24
参考文献25
致谢26
N6AMT基因和长链非编码RNA在褐飞虱生殖发育中的功能分析
引言
第一章 褐飞虱N6amt2的全长克隆与分析
1材料与方法
1.1主要试剂和仪器设备
1.1.1主要试剂
Trizol试剂，Invitrogen公司提供；
SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit, Clontech公司提供；
SV Total RNA Isolation System Kit, Wizard. SV Gel and PCR CleanUp System,Promega公司提供；
pGEMT easy体，Promega公司提供；
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)反转录酶、TaqDNA聚合酶、Markers,
Takara公司提供；
大肠杆菌感受态细胞Trans5α，南京百斯凯公司提供；
PCR引物合成和序列测序，南京金斯瑞公司提供；
其他试剂均为国产AR级（分析纯试剂）或进口分装AR级产品。
1.1.2主要仪器设备
PCR仪Mastercycler personal，德国Eppendorf公司提供；
梯度PCR仪PCR Thermal Cycler Dice，日本Takara公司提供；
HE120水平式核酸电泳仪，南京普阳科学仪器研究所提供；
凝胶成像仪一系统Gel Doc2000，美国BioRad公司提供；
NANODROP 1000核酸蛋白分析仪，美国Thermo公司提供；
Mirco21 R微量台式离心机，美国Thermo公司提供；
离心机Centrifuge 5424，德国Eppendorf公司提供；
恒温金属浴CHB100，杭州博日公司提供；
恒温振荡器ZAWY 200B，智诚公司提供；
涡旋混匀器，苏州捷美电子公司提供；
洁净工作台，上海博讯公司和上海苏净公司提供；
制冰机SIMF 124，日本SANYO公司提供；
超低温冰箱906，美国FORMA公司提供；
超纯水器ElIX10，美国millipore公司提供；
高温灭菌锅SS325，日本TOMY公司提供；
烘箱MC000712，美国MMM公司提供；
1.2供试昆虫的饲养
供实验用褐飞虱用水稻幼苗饲养在实验室养虫房内，控制温度为26±1摄氏度，湿度为70%到80%，光周期为16L:8D。采用无土栽培法种植水稻幼苗。每天用水壶浇适量的水，保持稻苗根部有合适的水量，待稻苗长至5cm左右可用于接种褐飞虱。每隔10天左右应将褐飞虱换入新的水稻苗盒中，确保其营养充足，迅速且大量地繁殖。
1.3总RNA的提取
1.3.1用于基因片段验证的总RNA提取
采用Trizol试剂进行总RNA提取，具体操作步骤如下:
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