灰霉病菌对嘧霉胺抗性相关基因的克隆
甲硫氨酸生物合成途径是灰霉病菌重要的生理生化过程，共有17个相关基因参与调控甲硫氨酸的生物合成。已有的研究表明嘧霉胺的作用原理与灰霉病菌中的甲硫氨酸的生物合成途径相关。该药剂创制于上世纪八十年代，对该病的控制作出了巨大贡献，但几年之后，田间出现了抗药性，近几年抗药性问题严重，但其抗性机理和作用机理还不是十分明确。所以该课题利用筛选计量法筛选出灰霉病菌对嘧霉胺敏感和高抗菌株，然后在核基因组数据库中查找病原菌中甲硫氨酸合成途径主要的9个相关基因并对其逐一进行克隆，比对敏感和抗性菌株之间的碱基序列，找出了突变位点，该突变发生于BC1G_00010基因的第117个密码子和基因BC1G_03241的第425个密码子上，进而初步明确上述9个基因是否与其嘧霉胺抗性相关，为进一步研究其抗性机制奠定理论基础。
目录
摘要.........................................1
关键词.........................................1
Abstract.........................................1
Key words.........................................1
引言.........................................1
1 材料与方法.........................................2
1.1供试的菌株.........................................2
1.2培养基及培养件..............................2
1.3灰霉菌菌丝体的获得2
1.3.1菌株活化....................2
1.3.2菌体液体摇培..................................2
1.4 基因组DNA的提取..................................2
1.5目的基因的克隆与分析.......3、4 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2 结果与分析..........................4
2.1退火温度筛选................................................................4
2.2目的基因克隆的电泳检测...........................................................4、5
2.3基因序列比对与分析.............................................................................5
2.4序列分析.................................................................................................................5
2.4.1分析后得无意义突变..........................................................................................6
2.4.2分析后得有意义突变.....................................................................................6、7
3 讨论.......................................................................................................7
致谢................................................................................................................6、7
参考文献..................................................................................................................7
灰霉病菌对嘧霉胺抗性相关基因的克隆
引言
引言
由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是世界各国果蔬生产上的主要病害，在中国各果蔬产区无论保护地栽培还是露地栽培均有发生，尤其是保护地生产发生普遍、危害最为严重。据调查：病害造成的烂果减产10%—30%以上，重者可达50%以上，严重影响果蔬的产量和品质。灰霉病菌具有繁殖快,遗传变异大和适合度高的特点,连续使用同一药剂易产生抗药性。1971年世界上首次报道了在荷兰温窒中仙客来上发现了灰霉病菌抗多菌灵菌株(Bellen和Seholten,1971);1987年周明国等在南京、上海等地也发现了灰霉病菌抗多菌灵菌株[1]。目前,灰葡萄孢已对苯并咪唑类、二甲酰亚胺类、N苯氨基甲酸酯类和苯胺基嘧啶类杀菌剂产生了不同程度的抗性[2]。
嘧霉胺低毒，水溶解性为0.121g/L。兼具保护和治疗作用,叶间疏导性不强。在根部施用嘧霉胺时表现出较强的内吸性能[3]。对二甲酞亚胺类、苯并咪哩类以及乙霉威已经产生抗性的菌株,也有很好的防治效果。但近些年随着嘧霉胺的广泛使用，在田间已经产生大量的灰霉病菌对嘧霉胺的抗性菌株[4]。所以本文以灰霉病菌对嘧霉胺敏感和抗性菌株出发，克隆一些可能相关的抗性基因进行测序比对。目的是从分子水平找到抗性机制。
1材料与方法
1.1供试菌株
嘧霉胺敏感菌株B812
目录
摘要.........................................1
关键词.........................................1
Abstract.........................................1
Key words.........................................1
引言.........................................1
1 材料与方法.........................................2
1.1供试的菌株.........................................2
1.2培养基及培养件..............................2
1.3灰霉菌菌丝体的获得2
1.3.1菌株活化....................2
1.3.2菌体液体摇培..................................2
1.4 基因组DNA的提取..................................2
1.5目的基因的克隆与分析.......3、4 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2 结果与分析..........................4
2.1退火温度筛选................................................................4
2.2目的基因克隆的电泳检测...........................................................4、5
2.3基因序列比对与分析.............................................................................5
2.4序列分析.................................................................................................................5
2.4.1分析后得无意义突变..........................................................................................6
2.4.2分析后得有意义突变.....................................................................................6、7
3 讨论.......................................................................................................7
致谢................................................................................................................6、7
参考文献..................................................................................................................7
灰霉病菌对嘧霉胺抗性相关基因的克隆
引言
引言
由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是世界各国果蔬生产上的主要病害，在中国各果蔬产区无论保护地栽培还是露地栽培均有发生，尤其是保护地生产发生普遍、危害最为严重。据调查：病害造成的烂果减产10%—30%以上，重者可达50%以上，严重影响果蔬的产量和品质。灰霉病菌具有繁殖快,遗传变异大和适合度高的特点,连续使用同一药剂易产生抗药性。1971年世界上首次报道了在荷兰温窒中仙客来上发现了灰霉病菌抗多菌灵菌株(Bellen和Seholten,1971);1987年周明国等在南京、上海等地也发现了灰霉病菌抗多菌灵菌株[1]。目前,灰葡萄孢已对苯并咪唑类、二甲酰亚胺类、N苯氨基甲酸酯类和苯胺基嘧啶类杀菌剂产生了不同程度的抗性[2]。
嘧霉胺低毒，水溶解性为0.121g/L。兼具保护和治疗作用,叶间疏导性不强。在根部施用嘧霉胺时表现出较强的内吸性能[3]。对二甲酞亚胺类、苯并咪哩类以及乙霉威已经产生抗性的菌株,也有很好的防治效果。但近些年随着嘧霉胺的广泛使用，在田间已经产生大量的灰霉病菌对嘧霉胺的抗性菌株[4]。所以本文以灰霉病菌对嘧霉胺敏感和抗性菌株出发，克隆一些可能相关的抗性基因进行测序比对。目的是从分子水平找到抗性机制。
1材料与方法
1.1供试菌株
嘧霉胺敏感菌株B812
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