吡虫啉甲基毒死蜱水胺硫磷残留三通道半定量免疫层析
随着化学农药防治成为植物病虫草害的重要防治手段，农药残留问题也日益突出。化学农药一般很难降解，易残留于自然环境与农产品中，对环境安全、人类健康造成威胁。随着人们对环境与食品安全认识的逐渐提高，使得农药残留检测分析技术受到越来越多的重视。因此建立快速、灵敏、准确、简便的农药残留检测方法对保护生态环境、保障人类的健康有着重要的意义。本课题旨在对免疫层析快速检测试纸条的研制，通过胶体金免疫层析法，对吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷三种农药残留进行快速的区分及半定量检测。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1主要仪器 4
1.2主要试剂 5
1.3人工抗原的制备5
1.4三种抗体的制备5
1.4.1小鼠免疫5
1.4.2融合小鼠的选择5
1.4.3杂交瘤细胞的制备6
1.4.4单克隆抗体的大量制备6
1.5胶体金的制备 6
1.6三种金标记单克隆抗体的制备 6
1.7免疫层析试纸条的制备 6
1.7.1胶金垫的制备6
1.7.2 NC膜的制备6
1.7.3试纸条的组装6
1.8试纸条操作方法及原理7
1.9最低检测线的测定7
1.10特异性评价7
2结果与分析7
2.1最低检测线 7
2.2特异性评价8
3结论9
4讨论9
致谢9
参考文献10
吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷残留三通道半定量免疫层析
引言
引言：免疫分析方法（Immunoassay, IA）是以抗原和抗体的特异性识别与可逆性结合反应为基础，把抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的一门技术。免疫层析分析试纸条（Immunochromatographic assa *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
y test strips）是在免疫层析技术（Immunochromatography）的基础上衍生出来的一种快速、简便的免疫分析方法，也简称为免疫试纸条[1,2]。免疫试纸条的核心技术包括标记物的制备和标记以及免疫试纸条的组装与调试。免疫试纸条方法的优点是操作简单、快捷、检测成本低；而且检测结果直观易辨；在半定量检测中可以不需要其他任何辅助仪器；适用于在线检测；易于推广等。
由于免疫试纸条检测技术在检测时间、检测方式、检测成本、结果显示等方面具有独特的优势，所以我们有理由相信，随着免疫试纸条技术的研究步伐的加快，将会运用在更多分析物上，同时也会有更多的产品出现，并得到消费者的广泛认同[3,4]。
本研究利用三种有机磷农药（吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷）的特异性单克隆抗体，制备了多通道免疫层析试纸条，目的是为了能够快速区分三种有机磷农药。试验结果理想，三种抗体之间无交叉反应。说明该试纸条能够作为一种快捷、简便，可以同时半定量检测并区分三种有机磷农药的检测工具。
1 材料与方法
1．1 主要仪器
由美国BioDot公司生产的XYZ3000三围喷膜仪，TSR3000试纸条读条仪，CM4000试纸斩切机；由美国NanoDrop公司生产的核酸蛋白分析仪；由德国Eppendorf公司生产的各种规格的单通道移液器，八通道连续可调移液器（20～200 μL）；由美国Sigma公司生产的离心机；由德国SIMENS公司生产的低温冰箱；由美国Thermo Electron公司生产的DNM29602 酶联检测仪；由日本Olympus公司生产的倒置显微镜；由苏净集团安泰公司生产的超净工作台；由美国Thermo Electron公司生产的Forma Series Ⅱ CO2培养箱；由美国BioTek公司生产的ELx405TM型全自动洗板机；由上海金钟仪器厂生产的S44Z1型水平低速离心机；由绍兴市卫星医疗设备制造有限公司生产的HW8型微量恒温器；由美国Pall公司生产的100KD超滤离心管，AcroSep? Protein A柱；由美国Corning公司生产的96孔及24孔细胞培养板，96孔酶标板；由天津市泰斯特仪器有限公司生产的DH5000A型电热恒温培养箱；由上海欣茂仪器公司生产的UV7504pc型分光光度计；由瑞士Integar Biosciences公司生产的Celline 350高密度细胞培养器；由日本SANYO公司生产的高压灭菌锅；由美国CBS公司生产的液氮罐；由美国Thermo Electron公司生产的纯水系统等仪器。
1．2 主要试剂
由德国Dr. Ehrensorfer公司生产的甲基对硫磷标准品，对硫磷标准品，杀螟硫磷标准品；由本实验室提供的三种农药的人工抗原；由Sigma公司生产的四甲基联苯胺（TMB），弗氏不完全佐剂（FIA），弗氏完全佐剂（FCA），氯金酸；由美国Gibco公司生产的杜氏改良的恩格尔基础培养基（DMEM），HAT液50×，HT液100×；由英国Roche公司生产的聚乙二醇（PEG）1500；由上海桃浦化工厂生产的双氧水（30 %）；由博士德生物工程有限公司生产的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG抗体；由兰州民海生物工程有限公司生产的优级新生牛血清；由美国Envirologix公司生产的抗体类型鉴定试剂盒；由美国Millipore公司生产的硝酸纤维素膜，玻璃棉，样品垫，吸水垫等试剂。其他试剂均为分析纯试剂。
1．3 人工抗原的制备
本试验所用的抗原与载体蛋白的结合物由本实验室提供。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1主要仪器 4
1.2主要试剂 5
1.3人工抗原的制备5
1.4三种抗体的制备5
1.4.1小鼠免疫5
1.4.2融合小鼠的选择5
1.4.3杂交瘤细胞的制备6
1.4.4单克隆抗体的大量制备6
1.5胶体金的制备 6
1.6三种金标记单克隆抗体的制备 6
1.7免疫层析试纸条的制备 6
1.7.1胶金垫的制备6
1.7.2 NC膜的制备6
1.7.3试纸条的组装6
1.8试纸条操作方法及原理7
1.9最低检测线的测定7
1.10特异性评价7
2结果与分析7
2.1最低检测线 7
2.2特异性评价8
3结论9
4讨论9
致谢9
参考文献10
吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷残留三通道半定量免疫层析
引言
引言：免疫分析方法（Immunoassay, IA）是以抗原和抗体的特异性识别与可逆性结合反应为基础，把抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的一门技术。免疫层析分析试纸条（Immunochromatographic assa *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
y test strips）是在免疫层析技术（Immunochromatography）的基础上衍生出来的一种快速、简便的免疫分析方法，也简称为免疫试纸条[1,2]。免疫试纸条的核心技术包括标记物的制备和标记以及免疫试纸条的组装与调试。免疫试纸条方法的优点是操作简单、快捷、检测成本低；而且检测结果直观易辨；在半定量检测中可以不需要其他任何辅助仪器；适用于在线检测；易于推广等。
由于免疫试纸条检测技术在检测时间、检测方式、检测成本、结果显示等方面具有独特的优势，所以我们有理由相信，随着免疫试纸条技术的研究步伐的加快，将会运用在更多分析物上，同时也会有更多的产品出现，并得到消费者的广泛认同[3,4]。
本研究利用三种有机磷农药（吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷）的特异性单克隆抗体，制备了多通道免疫层析试纸条，目的是为了能够快速区分三种有机磷农药。试验结果理想，三种抗体之间无交叉反应。说明该试纸条能够作为一种快捷、简便，可以同时半定量检测并区分三种有机磷农药的检测工具。
1 材料与方法
1．1 主要仪器
由美国BioDot公司生产的XYZ3000三围喷膜仪，TSR3000试纸条读条仪，CM4000试纸斩切机；由美国NanoDrop公司生产的核酸蛋白分析仪；由德国Eppendorf公司生产的各种规格的单通道移液器，八通道连续可调移液器（20～200 μL）；由美国Sigma公司生产的离心机；由德国SIMENS公司生产的低温冰箱；由美国Thermo Electron公司生产的DNM29602 酶联检测仪；由日本Olympus公司生产的倒置显微镜；由苏净集团安泰公司生产的超净工作台；由美国Thermo Electron公司生产的Forma Series Ⅱ CO2培养箱；由美国BioTek公司生产的ELx405TM型全自动洗板机；由上海金钟仪器厂生产的S44Z1型水平低速离心机；由绍兴市卫星医疗设备制造有限公司生产的HW8型微量恒温器；由美国Pall公司生产的100KD超滤离心管，AcroSep? Protein A柱；由美国Corning公司生产的96孔及24孔细胞培养板，96孔酶标板；由天津市泰斯特仪器有限公司生产的DH5000A型电热恒温培养箱；由上海欣茂仪器公司生产的UV7504pc型分光光度计；由瑞士Integar Biosciences公司生产的Celline 350高密度细胞培养器；由日本SANYO公司生产的高压灭菌锅；由美国CBS公司生产的液氮罐；由美国Thermo Electron公司生产的纯水系统等仪器。
1．2 主要试剂
由德国Dr. Ehrensorfer公司生产的甲基对硫磷标准品，对硫磷标准品，杀螟硫磷标准品；由本实验室提供的三种农药的人工抗原；由Sigma公司生产的四甲基联苯胺（TMB），弗氏不完全佐剂（FIA），弗氏完全佐剂（FCA），氯金酸；由美国Gibco公司生产的杜氏改良的恩格尔基础培养基（DMEM），HAT液50×，HT液100×；由英国Roche公司生产的聚乙二醇（PEG）1500；由上海桃浦化工厂生产的双氧水（30 %）；由博士德生物工程有限公司生产的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG抗体；由兰州民海生物工程有限公司生产的优级新生牛血清；由美国Envirologix公司生产的抗体类型鉴定试剂盒；由美国Millipore公司生产的硝酸纤维素膜，玻璃棉，样品垫，吸水垫等试剂。其他试剂均为分析纯试剂。
1．3 人工抗原的制备
本试验所用的抗原与载体蛋白的结合物由本实验室提供。
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