cmyc基因在高产和低产蛋鸡卵巢中的差异表达研究
鸡颗粒细胞是卵巢发育的标志，核蛋白类原癌基因c-Myc能参与颗粒细胞增殖过程。本实验目的在于研究c-Myc基因在高产蛋鸡和低产蛋鸡卵巢中的基因表达差异。以180日龄的玉谷草鸡商品蛋鸡为实验材料，进行产蛋记录后采集新鲜卵巢组织样品。提取组织样总RNA，反转录得到cDNA，利用实时荧光定量PCR技术，以β-actin为内参,检测不同产蛋性能蛋鸡中卵巢组织样的c-Myc基因表达差异。结果表明c-Myc基因在高产蛋鸡卵巢和低产蛋鸡卵巢中均有表达，但表达量差异极显著（P<0.01）。实时荧光定量PCR结果显示，和低产蛋鸡相比c-Myc基因在高产蛋鸡卵巢中表达量显著升高（P<0.01），可推测该基因与产蛋鸡卵巢发育及其生理活动有关。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.1实验动物及样品采集2
1.1.2药品及试剂2
1.1.3仪器设备2
1.2方法 2
1.2.1卵巢总RNA提取及检测2
1.2.2引物设计3
1.2.3 RNA反转录获得cDNA3
1.2.4验证引物退火温度3
1.2.4实时荧光定量PCR3
2结果与分析3
2.1 产蛋性能分组3
2.2 RNA质量控制4
2.3基因荧光定量引物验证4
2.4实时荧光PCR分析4
3讨论 5
4结论 6
致谢6
参考文献6
cMyc基因在高产和低产蛋鸡卵巢中的差异表达研究
引言
引言：蛋鸡的产蛋性能受多种因素的影响，主要由发育至等级发育阶段的卵泡数量来决定。禽类卵泡发育受下丘脑垂体卵巢轴激素调控的方式与哺乳动物类似。颗粒细胞是一种能够快速增殖的细胞，由于其特殊的结构和在卵巢发育中的重要作用，常被看作卵泡发育的标志[1]。颗粒细胞的增殖受各项激素调控，其状态决定卵泡的发育方向。而卵泡的生长发育情况能直接影响产蛋性能，因此卵泡发育场所 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
卵巢是研究产蛋性能的一个重要模型[2]。
cMyc基因是原癌基因myc家族的一员，是一种核蛋白类原癌基因。该基因通过参与与细胞增殖有关基因的转录调控，来影响细胞进程，既能促进细胞增殖，又能促进细胞凋亡[3]。cMyc基因在哺乳动物卵泡发育各个阶段的表达已被证实，研究发现cMyc具有促进卵泡发育和黄体形成的作用。1997年Putowski L. T. 等[4]通过原位杂交技术，首次发现cMyc在除原始卵泡外卵泡发育各个阶段都有表达，包括黄体阶段。由于颗粒细胞是一种能快速增殖的细胞，因此cMyc有可能参与调控颗粒细胞增殖过程，从影响产蛋性能。虽然cMyc基因最早发现是从鸡病毒原癌基因vMyc同源物中分离出来的[5]，但目前为止仅在肉鸡的心肌细胞中有研究报道。cMyc基因繁殖方面的作用在哺乳动物上已经有了初步的研究，但该基因在家禽卵泡发育方面的功能尚不清楚，关于cMyc不同产蛋性能鸡卵巢中的表达也尚无相关文献报道。
鸡蛋是一种经济优质的蛋白质食品，近年来我国对鸡蛋的需求量持续上升。蛋鸡的选育和整个家禽养殖业的发展密切相关。产蛋性能作为重要的生产性状，对蛋鸡养殖业有重要的影响。经过长期的人工选育工作，蛋鸡的产蛋性能已经达到了较高的水平，但是遗传进展的递增率却在下降[6]。随身分子生物学的发展，从分子水平上揭示基因和家禽生产性状间的关系已经成为可能。目前对蛋鸡基因差异性表达的报道，多是关于生长轴相关的基因，而繁殖方面的研究较少[7]。鉴于cMyc基因在卵泡发育方面的生理作用，本实验利用分子生物学手段以高产鸡群和低产鸡群卵巢为模型，检测cMyc基因在不同产蛋性能鸡卵巢中的表达。实验以江苏新曹农场的玉谷草鸡为研究对象。在鸡群产蛋高峰期进行一个月的产蛋记录，区分出高产群和低产群，在两个个体中分别随机抽取6个个体，采集每个个体卵巢组织样并提取总RNA。通过实时荧光定量PCR技术研究cMyc基因在不同产蛋性能鸡卵巢中的表达情况，旨在为今后家禽繁殖调控方面的分子遗传学相关研究提供相应理论依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 实验动物及样品采集
实验鸡群是均来自于江苏省新曹农场的100只同一批次180日龄的健康玉谷草鸡商品蛋鸡，鸡群采用个体笼养的方式养殖，饲喂同种饲料，饲养环境保持一致。连续一个月记录产蛋性状，根据产蛋高峰期的产蛋量分为高产群和低产群两组。饲养结束后，每组随机抽取6只鸡，屠宰后放血，采集卵巢新鲜组织样，并将采集的组织样立即投入 液氮中储存。
1．1．2 药品及试剂
Trizol Reagent，DEPC、Tris、Na2EDTA.2H20、DNAGreen、硼酸，SYBRPremixExTaq，DNAMarker、premix Taq Version、RNA反转录试剂盒，琼脂糖购自景同阵有限公司，异丙醇、氯仿、乙醇等试剂均为分析纯以上产品。
1.1.3 仪器设备
超低温冰箱、高速冷冻离心机、可调式微量移液器、梯度PCR仪、
电泳凝胶成像系统、DYYin2稳压电泳仪、千分之一电子天平、高压消毒锅、恒温水浴锅、实时突光定量PCR仪、匀架机、普通PCR仪、ND1000微量分光光度计
1．2 方法
1.2.1卵巢总RNA提取及检测
取不同个体蛋鸡卵巢磨碎组织样50100mg，加入液氮在超低温下迅速研磨成粉末状。用Trizol试剂消化组织样，加入氯仿4℃，12000rpm进行15min离心收取上清液。加入异丙醇混匀、离心沉淀RNA。用75%乙醇洗涤、离心取沉淀物。沉淀物在超净台下晾干后加入适量DEPC水吹打溶解，放于80℃保存。取2ulRNA样品用Nanodrop试剂进行浓度和纯度测定，OD260/280的值为1.9，RNA无降解可 用于RTPCR。将DEPC处理水稀释至2 ng/ul的RNA原液放于80℃冰箱保存。该步骤参照岳慧洁的方法[8]。
分别取2ul总RNA，在200 ul无菌RNase free PGR管中用RNA反转录试剂盒进行反转录获得cDNA。反应体系中含PrimeScript RT Master Mix 2ul，Rnase Free dH2O 6ul。反应程序为37℃ 15 min，85℃ 5 s。反转录产物稀释至200ng/ul，置于20℃环境保存。
1.2.2引物设计
在GenBank上检索cMyc基因全长序列，用PrimerPremier5.0软件设计cMyc基因特异性引物，引物由金斯瑞公司合成。另外，同时根据NCBI中蛋鸡编码区序列设计内参基因βactin的引物。引物序列及各引物的PCR 退火温度见表1。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.1实验动物及样品采集2
1.1.2药品及试剂2
1.1.3仪器设备2
1.2方法 2
1.2.1卵巢总RNA提取及检测2
1.2.2引物设计3
1.2.3 RNA反转录获得cDNA3
1.2.4验证引物退火温度3
1.2.4实时荧光定量PCR3
2结果与分析3
2.1 产蛋性能分组3
2.2 RNA质量控制4
2.3基因荧光定量引物验证4
2.4实时荧光PCR分析4
3讨论 5
4结论 6
致谢6
参考文献6
cMyc基因在高产和低产蛋鸡卵巢中的差异表达研究
引言
引言：蛋鸡的产蛋性能受多种因素的影响，主要由发育至等级发育阶段的卵泡数量来决定。禽类卵泡发育受下丘脑垂体卵巢轴激素调控的方式与哺乳动物类似。颗粒细胞是一种能够快速增殖的细胞，由于其特殊的结构和在卵巢发育中的重要作用，常被看作卵泡发育的标志[1]。颗粒细胞的增殖受各项激素调控，其状态决定卵泡的发育方向。而卵泡的生长发育情况能直接影响产蛋性能，因此卵泡发育场所 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
卵巢是研究产蛋性能的一个重要模型[2]。
cMyc基因是原癌基因myc家族的一员，是一种核蛋白类原癌基因。该基因通过参与与细胞增殖有关基因的转录调控，来影响细胞进程，既能促进细胞增殖，又能促进细胞凋亡[3]。cMyc基因在哺乳动物卵泡发育各个阶段的表达已被证实，研究发现cMyc具有促进卵泡发育和黄体形成的作用。1997年Putowski L. T. 等[4]通过原位杂交技术，首次发现cMyc在除原始卵泡外卵泡发育各个阶段都有表达，包括黄体阶段。由于颗粒细胞是一种能快速增殖的细胞，因此cMyc有可能参与调控颗粒细胞增殖过程，从影响产蛋性能。虽然cMyc基因最早发现是从鸡病毒原癌基因vMyc同源物中分离出来的[5]，但目前为止仅在肉鸡的心肌细胞中有研究报道。cMyc基因繁殖方面的作用在哺乳动物上已经有了初步的研究，但该基因在家禽卵泡发育方面的功能尚不清楚，关于cMyc不同产蛋性能鸡卵巢中的表达也尚无相关文献报道。
鸡蛋是一种经济优质的蛋白质食品，近年来我国对鸡蛋的需求量持续上升。蛋鸡的选育和整个家禽养殖业的发展密切相关。产蛋性能作为重要的生产性状，对蛋鸡养殖业有重要的影响。经过长期的人工选育工作，蛋鸡的产蛋性能已经达到了较高的水平，但是遗传进展的递增率却在下降[6]。随身分子生物学的发展，从分子水平上揭示基因和家禽生产性状间的关系已经成为可能。目前对蛋鸡基因差异性表达的报道，多是关于生长轴相关的基因，而繁殖方面的研究较少[7]。鉴于cMyc基因在卵泡发育方面的生理作用，本实验利用分子生物学手段以高产鸡群和低产鸡群卵巢为模型，检测cMyc基因在不同产蛋性能鸡卵巢中的表达。实验以江苏新曹农场的玉谷草鸡为研究对象。在鸡群产蛋高峰期进行一个月的产蛋记录，区分出高产群和低产群，在两个个体中分别随机抽取6个个体，采集每个个体卵巢组织样并提取总RNA。通过实时荧光定量PCR技术研究cMyc基因在不同产蛋性能鸡卵巢中的表达情况，旨在为今后家禽繁殖调控方面的分子遗传学相关研究提供相应理论依据。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 实验动物及样品采集
实验鸡群是均来自于江苏省新曹农场的100只同一批次180日龄的健康玉谷草鸡商品蛋鸡，鸡群采用个体笼养的方式养殖，饲喂同种饲料，饲养环境保持一致。连续一个月记录产蛋性状，根据产蛋高峰期的产蛋量分为高产群和低产群两组。饲养结束后，每组随机抽取6只鸡，屠宰后放血，采集卵巢新鲜组织样，并将采集的组织样立即投入 液氮中储存。
1．1．2 药品及试剂
Trizol Reagent，DEPC、Tris、Na2EDTA.2H20、DNAGreen、硼酸，SYBRPremixExTaq，DNAMarker、premix Taq Version、RNA反转录试剂盒，琼脂糖购自景同阵有限公司，异丙醇、氯仿、乙醇等试剂均为分析纯以上产品。
1.1.3 仪器设备
超低温冰箱、高速冷冻离心机、可调式微量移液器、梯度PCR仪、
电泳凝胶成像系统、DYYin2稳压电泳仪、千分之一电子天平、高压消毒锅、恒温水浴锅、实时突光定量PCR仪、匀架机、普通PCR仪、ND1000微量分光光度计
1．2 方法
1.2.1卵巢总RNA提取及检测
取不同个体蛋鸡卵巢磨碎组织样50100mg，加入液氮在超低温下迅速研磨成粉末状。用Trizol试剂消化组织样，加入氯仿4℃，12000rpm进行15min离心收取上清液。加入异丙醇混匀、离心沉淀RNA。用75%乙醇洗涤、离心取沉淀物。沉淀物在超净台下晾干后加入适量DEPC水吹打溶解，放于80℃保存。取2ulRNA样品用Nanodrop试剂进行浓度和纯度测定，OD260/280的值为1.9，RNA无降解可 用于RTPCR。将DEPC处理水稀释至2 ng/ul的RNA原液放于80℃冰箱保存。该步骤参照岳慧洁的方法[8]。
分别取2ul总RNA，在200 ul无菌RNase free PGR管中用RNA反转录试剂盒进行反转录获得cDNA。反应体系中含PrimeScript RT Master Mix 2ul，Rnase Free dH2O 6ul。反应程序为37℃ 15 min，85℃ 5 s。反转录产物稀释至200ng/ul，置于20℃环境保存。
1.2.2引物设计
在GenBank上检索cMyc基因全长序列，用PrimerPremier5.0软件设计cMyc基因特异性引物，引物由金斯瑞公司合成。另外，同时根据NCBI中蛋鸡编码区序列设计内参基因βactin的引物。引物序列及各引物的PCR 退火温度见表1。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/680.html
