江苏省南京市江宁地区规模化猪场猪蓝耳病抗体水平监测
江苏省南京市江宁地区规模化猪场猪蓝耳病抗体水平监测[20200507215950]
摘要：于2014年3～5月对南京市江宁地区8家规模化猪场随机抽取120份血样，采用ELISA方法对猪蓝耳病病毒抗体水平进行了监测研究。监测结果表明，120份血清中，PRRSV抗体阳性116份，总阳性率96.7%，阴性4份，总阴性率为3.3%；其中2家猪场PRRSV抗体阴性，阴性率分别为15%和5%，其余6家均为PRRSV抗体阳性，阳性率为100%。说明该地区猪群蓝耳病免疫水平整体较高，猪场免疫状况良好。
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关键字:规模化猪场；猪蓝耳病；抗体水平
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料与试剂 2
1．2 血液的采集 2
1．3 血样的处理 2
1．4 实验方法 2
1．4 实验过程 2
1．4．1 取出试剂盒 2
1．4．2 样品稀释 3
1．4．3 加样 3
1．4．4 孵育 3
1．4．5 洗涤 3
1．4．6 加入酶标二抗 3
1．4．7 孵育 3
1．4．8 洗涤 3
1．4．9 加底物 3
1．4．10 孵育 3
1．4．11 加终止液 3
1．4．12 读数 3
1．5 判定标准 3
1.5.1 实验的有效性 3
1.5.2 结果计算 3
2 结果与分析 3
2．1 120份血液样品监测结果 4
2．2 从猪的不同发育阶段来看血液样品PRRS血清抗体监测结果 4
3 讨论 5
3．1 ELISA法检测PRRS抗体水平 5
3．2 南京市江宁地区规模化猪场PRRS免疫状况良好，高于农业部70%的标准 5
3．3 不同发育阶段猪抗体水平检测分析 5
3．3．1 育肥猪的抗体效价略高于种母猪和仔猪 5
3．3．2疫苗种类对抗体水平的影响 5
3．3．3免疫时间的长短对抗体水平的影响 6
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致谢 6
参考文献： 7
图1 1～120份猪血液样品PRRS ELISA抗体 S/P统计表 4
表1 样品编号及来源 2
表2 判断标准 3
表3 仔猪抗体水平监测结果 4
表4 育肥猪抗体水平监测结果 4
表 5 种母猪抗体水平监测结果 5
江苏省南京市江宁地区规模化猪场蓝耳病抗体水平监测
引言
猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)即猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种繁殖和呼吸障碍传染病。病猪以母猪妊娠后期的早产、流产、产弱胎、木乃伊胎，以及仔猪呼吸困难和断奶后死亡率升高为特点[1]。我国将经典型猪繁殖与呼吸综合征列为二类动物疫病，将高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）列为一类动物疫病。该病于1987年在美国北卡罗纳衣阿华等州首次暴发[2],1990年在欧洲相继报道，欧美各国的猪群中引发了一场空前的“流产风暴”，造成了灾难性的经济损失[3],近年来已蔓延至亚太国家和地区[4]。1996年我国郭宝清等人首次从国内PRRS血清阳性猪群中分离到 PRRSV,证实了我国也有该病的流行[5]。由于PRRSV的基因型与血清型众多,毒株间交互免疫力差,且近年来病毒基因组的变异PRRSV变异株的出现,一旦感染PRRS,即在猪场内循环往复、无休止传播,给养猪业生产造成严重的经济损失[6]。2006年猪的“高热病”席卷了我国南方大部分地区，其传播速度快，发病覆盖面广，呈现“三高一低”的特点，体温高，发病率高，死亡率高和治愈率低。对养殖业造成了巨大的经济损失和持续的恐慌。
目前对该病尚无有效的治疗方法，疫苗免疫是其主要的防控手段,因而疫苗免疫效果的好坏直接关系到猪场蓝耳病的防控效果[7]。市场上使用的疫苗有防控经典毒株的猪蓝耳病普通灭活疫苗、弱毒疫苗和防控PRRSV变异株的高致病性灭活疫苗。除了疫苗本身因素外，猪只的母源抗体存在、猪群本身存在免疫抑制性疾病和疫苗免疫使用不当等各种因素，会导致蓝耳病疫苗免疫失败，从而爆发蓝耳病，因此定期监控猪场蓝耳病抗体水平，对控制该病的发生具有重要意义。本实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对南京市江宁区的规模化猪场蓝耳病的抗体水平进行监测，以反映该区蓝耳病免疫防控情况。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
一次性盛血器；TDL80-2B台式离心机，由上海安亭科学仪器制造；离心管；Bio-Tek ELx800酶标分析仪，美国伯腾仪器有限公司制造；LRH-250A生化培养箱,由广东省医疗器械厂生产；单道、Thermo Scientific Finnpipette Colour多道移液器，分别由大龙兴创实验仪器（北京）有限公司和赛默飞世尔（上海）有限公司生产；一次性吸头；猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测ELISA试剂盒，由韩国安捷公司生产。
1．2 血液的采集
对南京市江宁地区8家存栏200头以上的规模化猪场不同日龄的猪随机采血，小猪前腔静脉采血，大猪耳静脉采血，每份5ml,共采集血液样品120份，并进行编号（见表1）。
表1 样品编号及来源
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able 1 Number of Samples and source
种类 猪场1 猪场2 猪场3 猪场4 猪场5 猪场6 猪场7 猪场8
采样猪群 育肥猪 仔猪 育肥猪 育肥猪 种母猪 育肥猪 仔猪 种母猪
份数 20 10 20 10 10 20 20 10
编号 1～20 21～30 31～50 51～60 61～70 71～90 91～110 110～120
来源 湖熟 禄口 汤山 麒麟 麒麟 横溪 横溪 秣陵
疫苗种类 弱毒苗 灭活苗 弱毒苗 弱毒苗 灭活苗 弱毒苗 弱毒苗 灭活苗
采样时间距免疫时间间隔（天） 104 35 30 84 104 51 37 59
1．3 血样的处理
采集的血样2000r/min离心8～10min，取上层血清待检，如不能及时检测，则放置冰箱2～8℃冷藏保存，超过3天－20℃冷冻保存。
1．4 实验方法
间接ELISA法。AniGen 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测ELISA试剂盒，包括一个已包被好的PRRS病毒抗原的微孔板。检测过程中，抗原和稀释过的血清一同孵育，再同IgG-HRP酶标记的抗体反应。孵育结束后，所有游离的物质将在加入底物前被吸出或冲洗干净，而残留的酶将于血清中的抗-PRRS抗体直接成正比例，反应会在加入终止液是终止，双波长条件下，在450nm处读取吸光度值。
1．4．1 取出试剂盒
将试剂盒放在试验台上，恢复至室温。使用包被好抗原的酶标板。
1．4．2 样品稀释
样品稀释液稀释阴性、阳性、和样品（1:39稀释）。
1．4．3 加样
1）如果样品的OD 450值小于阴性对照OD 450值，那么S/P比值为0。
2）如果对照样品的平均OD值减去对照平均OD值应该在0.200以上，如果没有达到这些条件，实验失败，重做。阴性对照的平均OD值小于等于0.200。
摘要：于2014年3～5月对南京市江宁地区8家规模化猪场随机抽取120份血样，采用ELISA方法对猪蓝耳病病毒抗体水平进行了监测研究。监测结果表明，120份血清中，PRRSV抗体阳性116份，总阳性率96.7%，阴性4份，总阴性率为3.3%；其中2家猪场PRRSV抗体阴性，阴性率分别为15%和5%，其余6家均为PRRSV抗体阳性，阳性率为100%。说明该地区猪群蓝耳病免疫水平整体较高，猪场免疫状况良好。
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关键字:规模化猪场；猪蓝耳病；抗体水平
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摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 材料与试剂 2
1．2 血液的采集 2
1．3 血样的处理 2
1．4 实验方法 2
1．4 实验过程 2
1．4．1 取出试剂盒 2
1．4．2 样品稀释 3
1．4．3 加样 3
1．4．4 孵育 3
1．4．5 洗涤 3
1．4．6 加入酶标二抗 3
1．4．7 孵育 3
1．4．8 洗涤 3
1．4．9 加底物 3
1．4．10 孵育 3
1．4．11 加终止液 3
1．4．12 读数 3
1．5 判定标准 3
1.5.1 实验的有效性 3
1.5.2 结果计算 3
2 结果与分析 3
2．1 120份血液样品监测结果 4
2．2 从猪的不同发育阶段来看血液样品PRRS血清抗体监测结果 4
3 讨论 5
3．1 ELISA法检测PRRS抗体水平 5
3．2 南京市江宁地区规模化猪场PRRS免疫状况良好，高于农业部70%的标准 5
3．3 不同发育阶段猪抗体水平检测分析 5
3．3．1 育肥猪的抗体效价略高于种母猪和仔猪 5
3．3．2疫苗种类对抗体水平的影响 5
3．3．3免疫时间的长短对抗体水平的影响 6
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
致谢 6
参考文献： 7
图1 1～120份猪血液样品PRRS ELISA抗体 S/P统计表 4
表1 样品编号及来源 2
表2 判断标准 3
表3 仔猪抗体水平监测结果 4
表4 育肥猪抗体水平监测结果 4
表 5 种母猪抗体水平监测结果 5
江苏省南京市江宁地区规模化猪场蓝耳病抗体水平监测
引言
猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)即猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种繁殖和呼吸障碍传染病。病猪以母猪妊娠后期的早产、流产、产弱胎、木乃伊胎，以及仔猪呼吸困难和断奶后死亡率升高为特点[1]。我国将经典型猪繁殖与呼吸综合征列为二类动物疫病，将高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）列为一类动物疫病。该病于1987年在美国北卡罗纳衣阿华等州首次暴发[2],1990年在欧洲相继报道，欧美各国的猪群中引发了一场空前的“流产风暴”，造成了灾难性的经济损失[3],近年来已蔓延至亚太国家和地区[4]。1996年我国郭宝清等人首次从国内PRRS血清阳性猪群中分离到 PRRSV,证实了我国也有该病的流行[5]。由于PRRSV的基因型与血清型众多,毒株间交互免疫力差,且近年来病毒基因组的变异PRRSV变异株的出现,一旦感染PRRS,即在猪场内循环往复、无休止传播,给养猪业生产造成严重的经济损失[6]。2006年猪的“高热病”席卷了我国南方大部分地区，其传播速度快，发病覆盖面广，呈现“三高一低”的特点，体温高，发病率高，死亡率高和治愈率低。对养殖业造成了巨大的经济损失和持续的恐慌。
目前对该病尚无有效的治疗方法，疫苗免疫是其主要的防控手段,因而疫苗免疫效果的好坏直接关系到猪场蓝耳病的防控效果[7]。市场上使用的疫苗有防控经典毒株的猪蓝耳病普通灭活疫苗、弱毒疫苗和防控PRRSV变异株的高致病性灭活疫苗。除了疫苗本身因素外，猪只的母源抗体存在、猪群本身存在免疫抑制性疾病和疫苗免疫使用不当等各种因素，会导致蓝耳病疫苗免疫失败，从而爆发蓝耳病，因此定期监控猪场蓝耳病抗体水平，对控制该病的发生具有重要意义。本实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对南京市江宁区的规模化猪场蓝耳病的抗体水平进行监测，以反映该区蓝耳病免疫防控情况。
1 材料与方法
1．1 材料与试剂
一次性盛血器；TDL80-2B台式离心机，由上海安亭科学仪器制造；离心管；Bio-Tek ELx800酶标分析仪，美国伯腾仪器有限公司制造；LRH-250A生化培养箱,由广东省医疗器械厂生产；单道、Thermo Scientific Finnpipette Colour多道移液器，分别由大龙兴创实验仪器（北京）有限公司和赛默飞世尔（上海）有限公司生产；一次性吸头；猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测ELISA试剂盒，由韩国安捷公司生产。
1．2 血液的采集
对南京市江宁地区8家存栏200头以上的规模化猪场不同日龄的猪随机采血，小猪前腔静脉采血，大猪耳静脉采血，每份5ml,共采集血液样品120份，并进行编号（见表1）。
表1 样品编号及来源
T *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
able 1 Number of Samples and source
种类 猪场1 猪场2 猪场3 猪场4 猪场5 猪场6 猪场7 猪场8
采样猪群 育肥猪 仔猪 育肥猪 育肥猪 种母猪 育肥猪 仔猪 种母猪
份数 20 10 20 10 10 20 20 10
编号 1～20 21～30 31～50 51～60 61～70 71～90 91～110 110～120
来源 湖熟 禄口 汤山 麒麟 麒麟 横溪 横溪 秣陵
疫苗种类 弱毒苗 灭活苗 弱毒苗 弱毒苗 灭活苗 弱毒苗 弱毒苗 灭活苗
采样时间距免疫时间间隔（天） 104 35 30 84 104 51 37 59
1．3 血样的处理
采集的血样2000r/min离心8～10min，取上层血清待检，如不能及时检测，则放置冰箱2～8℃冷藏保存，超过3天－20℃冷冻保存。
1．4 实验方法
间接ELISA法。AniGen 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测ELISA试剂盒，包括一个已包被好的PRRS病毒抗原的微孔板。检测过程中，抗原和稀释过的血清一同孵育，再同IgG-HRP酶标记的抗体反应。孵育结束后，所有游离的物质将在加入底物前被吸出或冲洗干净，而残留的酶将于血清中的抗-PRRS抗体直接成正比例，反应会在加入终止液是终止，双波长条件下，在450nm处读取吸光度值。
1．4．1 取出试剂盒
将试剂盒放在试验台上，恢复至室温。使用包被好抗原的酶标板。
1．4．2 样品稀释
样品稀释液稀释阴性、阳性、和样品（1:39稀释）。
1．4．3 加样
1）如果样品的OD 450值小于阴性对照OD 450值，那么S/P比值为0。
2）如果对照样品的平均OD值减去对照平均OD值应该在0.200以上，如果没有达到这些条件，实验失败，重做。阴性对照的平均OD值小于等于0.200。
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