活禽市场禽流感病毒感染风险因素分析
禽流感的传播受诸多因素的影响。有研究证明活禽市场可能是人类禽流感感染的主要来源。本文旨在应用横断面调查和风险因素分析的方法，对我国12个省市的活禽市场或屠宰场进行活禽咽喉/泄殖腔棉拭子采集，并进行问卷调查，同时采用RT-PCR 方法检测通用型流感病毒。描述我国活禽市场和屠宰场的通用型禽流感病毒的分布，分析活禽市场和屠宰场禽流感病毒感染的风险因素，以期为降低活禽市场禽流感病毒的感染风险提供针对性的建议。结果表明，活禽通用型流感病毒阳性率为75.38%，地面有污水，市场构造封闭，环境消毒间隔>1周等因素是活禽市场活禽感染流感的主要风险因素。提示应加强对活禽市场的管理规范，对市场的整体构造布局和从业人员技能素质提出要求，保持经营档口适当的活禽密度，并严格落实清洗消毒等措施。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1对象2
1.1.2试剂与仪器2
1.2方法 3
1.2.1问卷设计3
1.2.2采样方法3
1.2.3 病毒的培养与处理3
1.2.3.1引物设计与合成3
1.2.3.2 病毒的扩增3
1.2.3.3 RNA的提取3
1.2.3.4一步法RTPCR4
1.2.4风险分析4
2结果与分析4
2.1总体情况4
2.1.1禽流感病毒检出状况5
2.2风险因素分析5
2.2.1 宰杀废弃物处理时间（市场营业时）6
2.2.2市场构造（封闭）6
2.2.3 不使用碱类消毒剂6
2.2.4面积7
3讨论与思考7
3.1讨论.7
3.2总结7
致谢8
参考文献8
附录10
活禽市场禽流感病毒感染风险因素分析
引言
禽流感是由正黏病毒引起的禽类的急性、传染性疾病，被OIE定为 A 类传染病。禽流感的发生给养禽业造 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
成严重危害。据FAO（2004）的报告20032004年禽流感在越南爆发所导致的损失预计为GDP的 0.3%1.8%[1]。禽流感爆发对中国家禽养殖农户的生计造成了巨大的冲击，农户的家禽养殖收入和家庭收入均显著下降。在控制其他变量的条件下，一次禽流感发生会造成农户人均家禽养殖收入平均降低65%，会造成农民人均收入下降29%[2]。禽流感病毒还会感染人，主要是H5和H7亚型可造成人的发病和死亡的公共卫生问题。2013年3月6月，上海、江苏、浙江、安徽等省发生了人感染H7N9新型禽流感的疫情，截止到2015年7月18日发现实验室确诊病例628例，死亡161例，病死率约为25.6%[3]。禽流感疫情的发生造成了严重的社会恐慌和国家安全问题，其防控关系国计民生。
禽流感的传播受诸多因素的影响。现有证据表明，禽流感病毒可在活禽市场传播和存活较长时间，并作为该病毒传播的源头而感染人或禽类。中国疾病预防控制中心对全国20092013年共从29省（自治区/直辖市）城乡活禽市场环境样本检测到Ａ型禽流感病毒核酸阳性2612份，检测核酸阳性率6.47%，分离到的禽流感病毒以H5和H9亚型为主[4]。有研究证明活禽市场可能是人类禽流感感染的主要来源。一项在浙江省人流感发病季节的研究证实每天销售的间隔时间、销售活禽的种类和数量、活禽市场的位置是活禽交易市场禽流感污染的主要风险因素。还有研究人员对针对尼日利亚和埃及的活禽市场开展调查，结果显示售卖野生禽类或其他动物和屠宰后是否进行手部消毒是强制日常消毒的活禽市场禽流感传播的主要风险因素。而感染H5N1的活禽市场中进行门、栅栏和屠宰后手部的消毒是防止禽流感传播的保护性因素[5]。商贩的操作也对活禽市场禽流感的传播起重要作用[6]。
可见，活禽市场是禽流感防控的关键点，本研究旨在应用横断面调查和风险因素分析的方法，对我国12个省市的活禽市场或屠宰场进行样品采集和问卷调查，描述我国活禽市场和屠宰场的禽流感病毒的分布，分析活禽市场和屠宰场禽流感病毒感染的风险因素，以期为降低活禽市场禽流感病毒的感染风险提供针对性的建议。
1 材料与方法
1．1材料
1．1．1 对象 根据中国动物卫生与流行病学中心“主要禽群疫病专项调查”项目，在江苏、上海、广东、贵州、青海、江西、湖北、宁夏、广西、黑龙江、新疆、西藏和云南等省份各选取2个具有代表性的地市级活禽批发市场（或屠宰场）和6个活禽零售市场（或屠宰场）。共104个活禽市场和屠宰场。
个体水平：在每个抽取的规模场中，以发现疫病的方式计算每个场需抽取多少份（n）的咽喉/泄殖腔双拭子样品。预定活禽批发市场、活禽交易市场和活禽屠宰场的H7亚型禽流感个体流行分别为3%、10%和10%，据此计算证明是否感染H7亚型禽流感所需的采样数量为100份、30份和30份（诊断试验敏感性为100%，置信水平95%）。场内采用简单随机抽样，兼顾各档口或批次。
1．1．2 试剂与仪器 TRIzol? LS Reagent购于美国Invitrogen Corporation。PrimeScriptTM One Step RTPCR Kit Ver.2，DNA Marker，DL2 000购于宝生物工程（大连）有限公司，琼脂糖购于上海YiTo公司；焦碳酸二乙酯（DEPC）购于上海生物工程技术服务有限公司；异丙醇、无水乙醇、氯仿、TrisHCl、EDTA、RNaseA、葡萄糖、琼脂糖、甘油、6×Loading Buffer、核酸染料等其余试剂均为进口或国产分析纯试剂。阿氏液（500mL）：葡萄糖10.25g，柠檬酸钠4.00g，柠檬酸0.275g，NaCl 2.10g ，加ddH2O至500mL，溶解15min，高压灭菌（115℃，20min），4℃保存备用。PBS（2000mL）：NaCl 16.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4 2.84g，KH2PO4 0.54g，加ddH2O溶解，滴定至pH 7.4，加ddH2O至2000 mL，分装，高压灭菌（120℃，20min），4℃保存备用。
超净工作台（美国Forma Scientific）、高速台式离心机（德国Heraeus Biofuge primoR）、PCR扩增仪（Perkin Elmeter Gen Amp PCR System 9600）、微波炉（海尔）、电泳仪（东方特力工贸公司）、紫外光凝胶成像系统（美国GeneGenius UVP型）、电子天平（德国SartoriusBS210S）、70℃超低温冰箱（日本三洋 MDF383E型），QIAxtractor高通量核酸提取仪及配套试剂盒、QIAgility全自动体系构建系统及QIAxcel 全自动实时毛细管电泳仪及配套试剂盒（德国QIAGEN公司）。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1对象2
1.1.2试剂与仪器2
1.2方法 3
1.2.1问卷设计3
1.2.2采样方法3
1.2.3 病毒的培养与处理3
1.2.3.1引物设计与合成3
1.2.3.2 病毒的扩增3
1.2.3.3 RNA的提取3
1.2.3.4一步法RTPCR4
1.2.4风险分析4
2结果与分析4
2.1总体情况4
2.1.1禽流感病毒检出状况5
2.2风险因素分析5
2.2.1 宰杀废弃物处理时间（市场营业时）6
2.2.2市场构造（封闭）6
2.2.3 不使用碱类消毒剂6
2.2.4面积7
3讨论与思考7
3.1讨论.7
3.2总结7
致谢8
参考文献8
附录10
活禽市场禽流感病毒感染风险因素分析
引言
禽流感是由正黏病毒引起的禽类的急性、传染性疾病，被OIE定为 A 类传染病。禽流感的发生给养禽业造 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
成严重危害。据FAO（2004）的报告20032004年禽流感在越南爆发所导致的损失预计为GDP的 0.3%1.8%[1]。禽流感爆发对中国家禽养殖农户的生计造成了巨大的冲击，农户的家禽养殖收入和家庭收入均显著下降。在控制其他变量的条件下，一次禽流感发生会造成农户人均家禽养殖收入平均降低65%，会造成农民人均收入下降29%[2]。禽流感病毒还会感染人，主要是H5和H7亚型可造成人的发病和死亡的公共卫生问题。2013年3月6月，上海、江苏、浙江、安徽等省发生了人感染H7N9新型禽流感的疫情，截止到2015年7月18日发现实验室确诊病例628例，死亡161例，病死率约为25.6%[3]。禽流感疫情的发生造成了严重的社会恐慌和国家安全问题，其防控关系国计民生。
禽流感的传播受诸多因素的影响。现有证据表明，禽流感病毒可在活禽市场传播和存活较长时间，并作为该病毒传播的源头而感染人或禽类。中国疾病预防控制中心对全国20092013年共从29省（自治区/直辖市）城乡活禽市场环境样本检测到Ａ型禽流感病毒核酸阳性2612份，检测核酸阳性率6.47%，分离到的禽流感病毒以H5和H9亚型为主[4]。有研究证明活禽市场可能是人类禽流感感染的主要来源。一项在浙江省人流感发病季节的研究证实每天销售的间隔时间、销售活禽的种类和数量、活禽市场的位置是活禽交易市场禽流感污染的主要风险因素。还有研究人员对针对尼日利亚和埃及的活禽市场开展调查，结果显示售卖野生禽类或其他动物和屠宰后是否进行手部消毒是强制日常消毒的活禽市场禽流感传播的主要风险因素。而感染H5N1的活禽市场中进行门、栅栏和屠宰后手部的消毒是防止禽流感传播的保护性因素[5]。商贩的操作也对活禽市场禽流感的传播起重要作用[6]。
可见，活禽市场是禽流感防控的关键点，本研究旨在应用横断面调查和风险因素分析的方法，对我国12个省市的活禽市场或屠宰场进行样品采集和问卷调查，描述我国活禽市场和屠宰场的禽流感病毒的分布，分析活禽市场和屠宰场禽流感病毒感染的风险因素，以期为降低活禽市场禽流感病毒的感染风险提供针对性的建议。
1 材料与方法
1．1材料
1．1．1 对象 根据中国动物卫生与流行病学中心“主要禽群疫病专项调查”项目，在江苏、上海、广东、贵州、青海、江西、湖北、宁夏、广西、黑龙江、新疆、西藏和云南等省份各选取2个具有代表性的地市级活禽批发市场（或屠宰场）和6个活禽零售市场（或屠宰场）。共104个活禽市场和屠宰场。
个体水平：在每个抽取的规模场中，以发现疫病的方式计算每个场需抽取多少份（n）的咽喉/泄殖腔双拭子样品。预定活禽批发市场、活禽交易市场和活禽屠宰场的H7亚型禽流感个体流行分别为3%、10%和10%，据此计算证明是否感染H7亚型禽流感所需的采样数量为100份、30份和30份（诊断试验敏感性为100%，置信水平95%）。场内采用简单随机抽样，兼顾各档口或批次。
1．1．2 试剂与仪器 TRIzol? LS Reagent购于美国Invitrogen Corporation。PrimeScriptTM One Step RTPCR Kit Ver.2，DNA Marker，DL2 000购于宝生物工程（大连）有限公司，琼脂糖购于上海YiTo公司；焦碳酸二乙酯（DEPC）购于上海生物工程技术服务有限公司；异丙醇、无水乙醇、氯仿、TrisHCl、EDTA、RNaseA、葡萄糖、琼脂糖、甘油、6×Loading Buffer、核酸染料等其余试剂均为进口或国产分析纯试剂。阿氏液（500mL）：葡萄糖10.25g，柠檬酸钠4.00g，柠檬酸0.275g，NaCl 2.10g ，加ddH2O至500mL，溶解15min，高压灭菌（115℃，20min），4℃保存备用。PBS（2000mL）：NaCl 16.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4 2.84g，KH2PO4 0.54g，加ddH2O溶解，滴定至pH 7.4，加ddH2O至2000 mL，分装，高压灭菌（120℃，20min），4℃保存备用。
超净工作台（美国Forma Scientific）、高速台式离心机（德国Heraeus Biofuge primoR）、PCR扩增仪（Perkin Elmeter Gen Amp PCR System 9600）、微波炉（海尔）、电泳仪（东方特力工贸公司）、紫外光凝胶成像系统（美国GeneGenius UVP型）、电子天平（德国SartoriusBS210S）、70℃超低温冰箱（日本三洋 MDF383E型），QIAxtractor高通量核酸提取仪及配套试剂盒、QIAgility全自动体系构建系统及QIAxcel 全自动实时毛细管电泳仪及配套试剂盒（德国QIAGEN公司）。
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