裂谷热病毒ns蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

本实验通过将裂谷热病毒 （Rift Valley fever virus，RVFV）非结构蛋白（NS）克隆到pET-28a原核表达载体上，得到重组质粒pET-28a-NS，转化至大肠杆菌Arctic Express感受态细胞并进行诱导表达，分别用SDS-PAGE 和 Western- blot 鉴定重组蛋白。结果表明，重组的RVFV-NS 蛋白主要在包涵体中表达，上清中表达量少。Western- blot鉴定重组蛋白可与His抗体反应。用重组蛋白免疫 BALB/ c 小鼠，制备单克隆抗体，用间接 ELISA检测细胞上清，经四次亚克隆，最终筛选出了两株杂交瘤细胞。两株细胞上清抗体滴度均可达6400，Western- blot检测表明两株细胞上清均可与重组蛋白发生特异性反应。将重组蛋白免疫山羊制备高免血清，与制备的单抗一同进行阻断ELISA检测，结果显示阳性血清经两株抗体检测阻断率分别为48.6%、90.22%，表明单抗2D6可用于构建阻断ELISA。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2方法 2
1.2.1重组蛋白的表达纯化2
1.2.2单克隆抗体的制备3
1.2.3单克隆抗体的鉴定4
1.2.4腹水的制备4
1.2.5山羊多抗的制备4
1.2.6单克隆抗体及多抗效价的检测4
1.2.7单克隆抗体的ELISA应用5
2结果5
2.1重组蛋白的表达与鉴定5
2.2重组蛋白的纯化5
2.3免疫小鼠血清效价的检测6
2.4间接ELISA鉴定单克隆抗体的特异性6
2.5 Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性7
2.6单克隆抗体及山羊多抗效价的检测7
2.7单克隆抗体的ELISA应用6
3讨论 8
致谢9
参考文献10
裂谷热病毒NS蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备

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