10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在仔猪体内药动学研究
10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在仔猪体内药动学研究[20200507182918]
摘要：头孢噻呋是动物专用的第三代头孢类抗生素，具有广谱、高效、安全等优点。本文研究新研发的10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在断奶仔猪体内的药物代谢动力学。通过单次肌肉注射给药10mg/kg后，不同时间点采取血浆样品，HPLC测定其体内药物浓度，得到其药时曲线及相关药动学参数。本研究的目标药物的主要药物动力学参数是：T1/2（ke）为13.86h，T(max)为7.81h，C(max)为22.09ug/ml，AUC为130.35（ug/ml）·h。研究结果表明目标药物在仔猪机体内可保持血药浓度在很长时间内大于对敏感菌的MIC，因此该注射液有明显的长效缓释作用，为该注射液在兽医临床上的广泛使用提供科学的理论依据。
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关键字:盐酸头孢噻呋；高效液相色谱法；药时曲线；药动学参数
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 实验试剂2
1.1.2 实验器材2
1.1.3 主要溶液的配制2
1.1.4 实验动物3
1.2 方法3
1.2.1 猪场采血3
1.2.2 实验室HLPC测定 3
1．3 数据统计分析4
2 结果与分析 4
2．1 方法专属性4
2．2 标准曲线6
2．3 检测限及定量限6
2．4 回收率6
2．5 药物动力学数据7
3 讨论 8
3.1盐酸头孢噻呋的研究现状8
3.2 盐酸头孢噻呋的HPLC色谱条件的选择8
3.2.1波长的选择9
3.2.2流动相的选择9
3.2.3色谱柱的选择9
3.3血浆样品的分离和提取9
4总结9
致谢 9
参考文献 10
10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在仔猪体内的药动学研究
引言
引言
头孢噻呋是动物专用的第三代头孢类抗生素，具有广谱杀菌作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌（包括产β-内酰胺酶菌）的抗菌活性较强，内服不吸收，肌内和皮下注射吸收效果较好，体内分布广泛，不能通过血脑屏障。目前临床上上市剂型为盐酸头孢噻呋混悬注射液和注射用头孢噻呋钠，推荐的给药方案为：肌内注射，一次量每1kg体重，牛1.1mg,猪3-5kg，犬2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
2mg。每日一次，连用三天[1]。多次给药费时费力，对动物造成很大的应激，不利于疾病的恢复。迫切需要制备其长效制剂解决实际应用中的难题。本文考察新研制的10%缓释制剂在猪体内的药动学规律，为该缓释注射液在兽医临床上的使用提供科学的理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 实验试剂
盐酸头孢噻呋原料药，≥99%,山东鲁抗医药股份有限公司；
碘乙酰胺，≥98%，天津希恩思生化科技有限公司；
二硫赤鲜醇，≥99%，天津希恩思生化科技有限公司；
三氟乙酸，天津市科密欧化学试剂有限公司；
乙腈，色谱级,美国天地（TEDIA）色谱试剂；
甲醇，色谱级，美国天地（TEDIA）色谱试剂；
醋酸铵，分析纯（AR），上海试四维赫维化工有限公司；
磷酸，优级纯（GR），国药集团化学试剂有限公司；
四硼酸钠，分析纯（AR），上海青析化工科技有限公司；
氯化钾，分析纯（AR），上海实意化学试剂有限公司；
磷酸二氢钾，分析纯（AR），南京化学试剂有限公司；
氢氧化钾，分析纯（AR），南京化学试剂有限公司；
肝素钠注射液，上海信谊药厂有限公司；
超纯水，实验室自制。
1．1．2 实验器材
高效液相色谱仪：waters2695型高效液相色谱仪（2489型紫外检测器）；
海尔冰箱：BCD-237F型，海尔集团股份有限公司；
恒温水浴锅：B-220型，上海亚荣生化仪器厂；
电热恒温干燥箱：：PYX-DHS-40×50-BS型，上海跃进医疗器械厂；
电子天平：BS-210S型，北京赛多利斯天平有限公司；
高速冷冻离心机：3K15，德国Sigma公司；
漩涡混合仪：WH-3型，上海沪西分析仪器厂；
氮吹仪：DC12H型，上海安谱科学仪器有限公司
超声波清洗仪：KQ2200型，昆山市超声仪器有限公司；
pH计：DELTA360型，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；
固相萃取柱：Sep-Pak Vac C18（60 mg/3cc）美国Waters公司。
1．1．3 主要溶液的配制
（1）盐酸头孢噻呋储备液（400ug/ml）: 精密称取0.04g盐酸头孢噻呋标准品,置于烧杯中，用少量0.05mol/l的醋酸铵溶解后，用0.05mol/l的醋酸铵溶液于100ml容量瓶中定容至刻度，即成浓度为400ug/ml的盐酸头孢噻呋储备液，临用前用流动相配成系列标准浓度。
（2）醋酸铵（0.05mol/L）: 精密称取0.3854g醋酸铵，置于烧杯中，用少量双蒸水溶解，加到100mL容量瓶内并用双蒸水定容至刻度，即成0.05mol/l的醋酸铵溶液。
（3）硼酸盐缓冲液(pH=9): 准确称取四硼酸钠1.9g，氯化钾0.37g，置于烧杯中，用少量双蒸水溶解，加到100ml容量瓶内并用双蒸水定容至刻度。
（4）磷酸盐缓冲液(pH=7): 准确称取0.34g磷酸二氢钾置于烧杯中，加水约70m *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
l后用氢氧化钾调节pH到7.0，定容至l00mL。
（5）提取液0.4%(w/v): 称取0.4g二硫赤藓醇溶于100ml的硼酸盐缓冲液中。
（6）碘乙酰胺溶液: 1.4%(w/v)1.4g碘乙酰胺溶于100ml磷酸盐缓冲液中。
1．1．4 实验动物
南京绿康种猪有限公司，6头大白猪×长白猪×杜洛克猪的三元杂交猪，体重为20千克左右，按常规模式饲养，饲料为不含任何抗生素的日粮，实验前禁食12h，但供给充足饮水。
1．2 方法
1．2．1 实验动物分组及血浆样品的采集
将所选实验对象随机分成实验组和对照组，每组3头，实验组的每头猪均采取耳后肌内注射长效头孢噻呋注射液10mg/kg，分别选取三头实验猪及一头对照猪于给药前及注射后 1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h、192h于猪前腔静脉采血，每次采血5ml/头，置入有肝素抗凝的离心管，4000r/min离心10min,取上清液置于-20℃以下冰箱中保存。
1．2．2 实验室HLPC测定
1．2．2．1色谱分析条件
色谱柱: Agilent TC一Cl8(5um,4.6x250mm,I.D)
保护柱：Agilent TC一Cl8(5um,4.6xl2.5mm,I.D)
图1空白血浆色谱图
图2空白血浆添加20ug/ml盐酸头孢噻呋色谱图
图3流动相色谱图
图4流动相添加盐酸头孢噻呋色谱图
2．2 标准曲线
在前人一定的实验研究成果的基础上[3]，经过我们自己不断的摸索试验条件，盐酸头孢噻呋血浆标准工作曲线的药物浓度线形范围、回归方程均符合试验的要求。盐酸头孢噻呋及其代谢产物在血浆中浓度测量值见表1，回归方程(x表示药物标准品在空白血浆的浓度，y表示药物峰面积)及相关系数是见表2。盐酸头孢噻呋在血浆中的标准工作曲线图见图7。
摘要：头孢噻呋是动物专用的第三代头孢类抗生素，具有广谱、高效、安全等优点。本文研究新研发的10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在断奶仔猪体内的药物代谢动力学。通过单次肌肉注射给药10mg/kg后，不同时间点采取血浆样品，HPLC测定其体内药物浓度，得到其药时曲线及相关药动学参数。本研究的目标药物的主要药物动力学参数是：T1/2（ke）为13.86h，T(max)为7.81h，C(max)为22.09ug/ml，AUC为130.35（ug/ml）·h。研究结果表明目标药物在仔猪机体内可保持血药浓度在很长时间内大于对敏感菌的MIC，因此该注射液有明显的长效缓释作用，为该注射液在兽医临床上的广泛使用提供科学的理论依据。
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关键字:盐酸头孢噻呋；高效液相色谱法；药时曲线；药动学参数
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言 1
1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 实验试剂2
1.1.2 实验器材2
1.1.3 主要溶液的配制2
1.1.4 实验动物3
1.2 方法3
1.2.1 猪场采血3
1.2.2 实验室HLPC测定 3
1．3 数据统计分析4
2 结果与分析 4
2．1 方法专属性4
2．2 标准曲线6
2．3 检测限及定量限6
2．4 回收率6
2．5 药物动力学数据7
3 讨论 8
3.1盐酸头孢噻呋的研究现状8
3.2 盐酸头孢噻呋的HPLC色谱条件的选择8
3.2.1波长的选择9
3.2.2流动相的选择9
3.2.3色谱柱的选择9
3.3血浆样品的分离和提取9
4总结9
致谢 9
参考文献 10
10%盐酸头孢噻呋缓释注射剂在仔猪体内的药动学研究
引言
引言
头孢噻呋是动物专用的第三代头孢类抗生素，具有广谱杀菌作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌（包括产β-内酰胺酶菌）的抗菌活性较强，内服不吸收，肌内和皮下注射吸收效果较好，体内分布广泛，不能通过血脑屏障。目前临床上上市剂型为盐酸头孢噻呋混悬注射液和注射用头孢噻呋钠，推荐的给药方案为：肌内注射，一次量每1kg体重，牛1.1mg,猪3-5kg，犬2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
2mg。每日一次，连用三天[1]。多次给药费时费力，对动物造成很大的应激，不利于疾病的恢复。迫切需要制备其长效制剂解决实际应用中的难题。本文考察新研制的10%缓释制剂在猪体内的药动学规律，为该缓释注射液在兽医临床上的使用提供科学的理论依据。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 实验试剂
盐酸头孢噻呋原料药，≥99%,山东鲁抗医药股份有限公司；
碘乙酰胺，≥98%，天津希恩思生化科技有限公司；
二硫赤鲜醇，≥99%，天津希恩思生化科技有限公司；
三氟乙酸，天津市科密欧化学试剂有限公司；
乙腈，色谱级,美国天地（TEDIA）色谱试剂；
甲醇，色谱级，美国天地（TEDIA）色谱试剂；
醋酸铵，分析纯（AR），上海试四维赫维化工有限公司；
磷酸，优级纯（GR），国药集团化学试剂有限公司；
四硼酸钠，分析纯（AR），上海青析化工科技有限公司；
氯化钾，分析纯（AR），上海实意化学试剂有限公司；
磷酸二氢钾，分析纯（AR），南京化学试剂有限公司；
氢氧化钾，分析纯（AR），南京化学试剂有限公司；
肝素钠注射液，上海信谊药厂有限公司；
超纯水，实验室自制。
1．1．2 实验器材
高效液相色谱仪：waters2695型高效液相色谱仪（2489型紫外检测器）；
海尔冰箱：BCD-237F型，海尔集团股份有限公司；
恒温水浴锅：B-220型，上海亚荣生化仪器厂；
电热恒温干燥箱：：PYX-DHS-40×50-BS型，上海跃进医疗器械厂；
电子天平：BS-210S型，北京赛多利斯天平有限公司；
高速冷冻离心机：3K15，德国Sigma公司；
漩涡混合仪：WH-3型，上海沪西分析仪器厂；
氮吹仪：DC12H型，上海安谱科学仪器有限公司
超声波清洗仪：KQ2200型，昆山市超声仪器有限公司；
pH计：DELTA360型，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；
固相萃取柱：Sep-Pak Vac C18（60 mg/3cc）美国Waters公司。
1．1．3 主要溶液的配制
（1）盐酸头孢噻呋储备液（400ug/ml）: 精密称取0.04g盐酸头孢噻呋标准品,置于烧杯中，用少量0.05mol/l的醋酸铵溶解后，用0.05mol/l的醋酸铵溶液于100ml容量瓶中定容至刻度，即成浓度为400ug/ml的盐酸头孢噻呋储备液，临用前用流动相配成系列标准浓度。
（2）醋酸铵（0.05mol/L）: 精密称取0.3854g醋酸铵，置于烧杯中，用少量双蒸水溶解，加到100mL容量瓶内并用双蒸水定容至刻度，即成0.05mol/l的醋酸铵溶液。
（3）硼酸盐缓冲液(pH=9): 准确称取四硼酸钠1.9g，氯化钾0.37g，置于烧杯中，用少量双蒸水溶解，加到100ml容量瓶内并用双蒸水定容至刻度。
（4）磷酸盐缓冲液(pH=7): 准确称取0.34g磷酸二氢钾置于烧杯中，加水约70m *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
l后用氢氧化钾调节pH到7.0，定容至l00mL。
（5）提取液0.4%(w/v): 称取0.4g二硫赤藓醇溶于100ml的硼酸盐缓冲液中。
（6）碘乙酰胺溶液: 1.4%(w/v)1.4g碘乙酰胺溶于100ml磷酸盐缓冲液中。
1．1．4 实验动物
南京绿康种猪有限公司，6头大白猪×长白猪×杜洛克猪的三元杂交猪，体重为20千克左右，按常规模式饲养，饲料为不含任何抗生素的日粮，实验前禁食12h，但供给充足饮水。
1．2 方法
1．2．1 实验动物分组及血浆样品的采集
将所选实验对象随机分成实验组和对照组，每组3头，实验组的每头猪均采取耳后肌内注射长效头孢噻呋注射液10mg/kg，分别选取三头实验猪及一头对照猪于给药前及注射后 1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h、192h于猪前腔静脉采血，每次采血5ml/头，置入有肝素抗凝的离心管，4000r/min离心10min,取上清液置于-20℃以下冰箱中保存。
1．2．2 实验室HLPC测定
1．2．2．1色谱分析条件
色谱柱: Agilent TC一Cl8(5um,4.6x250mm,I.D)
保护柱：Agilent TC一Cl8(5um,4.6xl2.5mm,I.D)
图1空白血浆色谱图
图2空白血浆添加20ug/ml盐酸头孢噻呋色谱图
图3流动相色谱图
图4流动相添加盐酸头孢噻呋色谱图
2．2 标准曲线
在前人一定的实验研究成果的基础上[3]，经过我们自己不断的摸索试验条件，盐酸头孢噻呋血浆标准工作曲线的药物浓度线形范围、回归方程均符合试验的要求。盐酸头孢噻呋及其代谢产物在血浆中浓度测量值见表1，回归方程(x表示药物标准品在空白血浆的浓度，y表示药物峰面积)及相关系数是见表2。盐酸头孢噻呋在血浆中的标准工作曲线图见图7。
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