不同品种鸡在胚胎期肌肉发育差异的研究
随着人民的生活水平的不断的提高，生长速度高、肌肉质量较低的肉鸡品种已经不再受到消费者们的喜爱。因此，充分开展鸡肉品质的相关研究，对于地方鸡种的开发利用和优质肉鸡的生产都至关重要。本研究选取台湾红标土鸡和白羽鸡为实验素材,对胚胎期的胸肌、腿肌肌纤维的发育规律进行研究；并对生肌因子在胚胎期对于肌肉发育的影响进行了研究；同时还对雌雄之间的肌肉发育差异进行了讨论。经研究发现，（1）在胚胎期肌纤维的发育就已基本形成，同年龄段同性别同一部位的红标鸡较白羽鸡肌纤维的数量更多，且肌纤维的直径更小。（2）生肌决定因子MyoD在胚胎期与肌纤维的发育密切相关。MyoD基因在成肌细胞增殖过程中表达，而MyoG基因的蛋白主要在分化末期表达。MyoD、MyoG在红标鸡与白羽鸡中的表达程度均无显著差异，但红标鸡中MyoG的表达量要微高于白羽鸡。（3）在同一品种鸡（白羽鸡）中，雌性肉鸡的肌肉发育相比较于雄性肉鸡要更加发达。本研究可为进一步深入研究胚胎期肌肉发生过程及其调控机理提供理论依据。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1实验材料 4
1.1.2实验试剂4
1.1.3 实验仪器4
1.2方法5
1.2.1样品准备5
1. 2. 2 普通PCR 6
1. 2. 3 鸡胚肌肉组织切片的制作 7
2结果与分析7
2.1红标鸡与白羽鸡在胚胎期的肌纤维发育情况 8
2.2肌纤维发育相关基因的表达10
3讨论 10
3.1同一品种的鸡在胚胎期不同时期的肌肉发育差异 10
3.1.1肌纤维的形成11
3.1.2 肌纤维的发育 11
3.2 影响肌纤维发育的基因的表达特性 12
致谢12
参考文献 12
不同品种的鸡在胚胎期肌肉发育差异的研究
引言
引言
人们为了让鸡的生长速 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
度更快，使经济效益更高，导致了鸡肉品质剧烈下降，严重损害了养鸡产业的可持续健康发展。究其根本，在于对鸡的生长速度等性状进行选育的同时，忽略了对肉质不利的因素与影响。这一问题已然引起了世界范围内生物学家以及动物科学专家的高度重视，并且使他们开始了对肉质的研究。影响肌肉品质的因子有很多，其中包括畜禽的种类、大小、饲料品质这些原因都可以影响肌肉的组织纤维、胶原质、液体、酶的生物学特性，其中肌纤维的形成生长规律及其阶段中相关基因的调控扮演着十分重要的角色。
另外，随着最近对肌肉发育及其调控机理的认识愈来愈深入，我们发现，肌细胞的分化都是由一系列转录因子（Pax3myoDmyoG、C/EBPPPAR SREBP）顺序调控的结果，其基本调控的过程已基本得到发现与认知。而生肌因子MyoD基因在肌肉的产生中起到了关键的调控作用，可激活睡眠状态的肌肉里的特殊基因，并使其与肌肉特有的增强子协同帮助机体进行转录【1】。肌细胞生成素( myogenin , MyoG) 是生肌调节因子 MRFs( MyoD、MyoG、Myf5和 MRF4) 家族的一个成员，它能够控制成肌细胞融合的开始与结束,促进成肌细胞数目增加，使单核成肌细胞演变为多核的肌纤维。因此被认为在 MyoD 家族中拥有难以代替的地位【2】。国内外研究对鸡肌肉生长的调整与控制研究也取得了较多的进步，发现了很多与具有联系肌肉发育功能的基因。这些工作为本项目研究取得重大突破提供了理论基础。
另外，许多的研究发现，畜禽的肌肉品质与其肌肉组织学特性有显著的相关性，特别是肌纤维密度。肌纤维直径对肌肉品质的影响非常显著，而肌纤维特性大多是数量性状，一般受微效多基因控制【3】。一般情况下肌纤维密度越高，其肌纤维直径越小，二者呈现出负相关的联系。李同树等（2004）【4】通过肌纤维密度和直径对7个不同鸡种的嫩度进行评定。结果显示，虽然排序不同，但是两个指标均能区分鸡种间嫩度的差异。与剪切值、胶原蛋白、嫩度对比，肌纤维密度评定结果差异较大，而肌纤维直径评定结果却比较相似，说明用肌纤维直径评定嫩度精确性高于肌纤维密度，而且关于两个指标在肌肉嫩度中的作用大小，初步判定肌纤维直径作用大于肌纤维密度。有研究发现，肌纤维直径增大，白肌纤维增多而红肌纤维减少是形成 PSE 肉的组织学基础。【5】
20世纪80年代末至今，内地对于优质肌肉的需求量越来越高，这一情况刺激了科研院所和企业纷纷参与到优质肉鸡育种的队伍中。【6】然而，目前对于优质鸡的概念以及理解还不够透彻，至今都还没有一个统一明确的定义。众多研究者认为应该从血统、外貌、肉品质、屠宰年龄、上市体重、社会消费习惯和市场接受程度等角度综合考虑。王书恩，王秋梅（2004）定义如下：总的来说，优质鸡是中国家鸡的一个代名词【7】。王光瑛，李昂（2002）报道：优质鸡的优质受风味及其影响物质如一些脂肪酸、社会风俗习惯、肉的构造等因素影响【8】。另外有研究报道：优质鸡是相对于生长快速的肉用型鸡而言，优质鸡的概念首先是指肉的品质，优质鸡是没有快大鸡杂交的适时屠宰、肉质鲜嫩的地方鸡种【9】。
不管何种定义或者是描述，优质鸡的含义已基本了然。优质鸡应该是指在饲养到一定日龄而肉质特别鲜美、风味独特的肉鸡品种。而肉质与肌纤维有紧密联系，肌纤维的数目能够影响肉的品质。肌纤维数量在动物出生前就已基本稳定,肌肉的生长只是肌纤维的伸长和加粗的结果, 纤维数量保持不变。根据遗传相关系数和众多实验研究的结果, 细小肌纤维的数目越多, 肉品质就越好。因此,国内外许多研究者致力于肌纤维的研究。研究基因对肌纤维的发育规律的影响，既可以为肉质性状的研究提供帮助，又能给提高鸡肉肉质的研究提供理论基础。有利于更深入地研究肌纤维的生长发育规律，为发育生物学的研究提供有益的参考。
本研究选取台湾红标土鸡和白羽鸡为实验素材,对胚胎期的胸肌、腿肌肌纤维的发育规律进行研究;并且采用PCR技术分析了生肌调节因子——生肌决定因子( myogenic determining factor，MyoD) 、肌细胞生成素( myogenin，MyoG) 、生肌因子5( myogenic factor 5，Myf5)，在白羽鸡和红标鸡胚胎发育不同时期的胸肌、腿肌中的表达规律；并通过分析不同胚龄肌纤维的类型与数量，研究品种间胚胎期肌纤维发育的差异，为进一步深入研究胚胎期肌肉发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据。
材料与方法
1.1材料
1.1.1 实验材料
本实验所需材料选取种蛋200枚，编号同批孵化。孵化温度37摄氏度，湿度70%，分别于9、12、15、18、20胚龄时照蛋检验并随机选取正常发育的胚蛋15枚，进行胸肌与腿肌部分的采样。
1.1.2 实验试剂
（由南京农大动科学院杜文兴实验组提供） Trizol试剂；氯仿；异丙醇；乙醇；甲醛；石蜡；苏木精染剂；伊红染剂；PBS；血清；抗体；DAPI；石蜡；蔗糖等
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1实验材料 4
1.1.2实验试剂4
1.1.3 实验仪器4
1.2方法5
1.2.1样品准备5
1. 2. 2 普通PCR 6
1. 2. 3 鸡胚肌肉组织切片的制作 7
2结果与分析7
2.1红标鸡与白羽鸡在胚胎期的肌纤维发育情况 8
2.2肌纤维发育相关基因的表达10
3讨论 10
3.1同一品种的鸡在胚胎期不同时期的肌肉发育差异 10
3.1.1肌纤维的形成11
3.1.2 肌纤维的发育 11
3.2 影响肌纤维发育的基因的表达特性 12
致谢12
参考文献 12
不同品种的鸡在胚胎期肌肉发育差异的研究
引言
引言
人们为了让鸡的生长速 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
度更快，使经济效益更高，导致了鸡肉品质剧烈下降，严重损害了养鸡产业的可持续健康发展。究其根本，在于对鸡的生长速度等性状进行选育的同时，忽略了对肉质不利的因素与影响。这一问题已然引起了世界范围内生物学家以及动物科学专家的高度重视，并且使他们开始了对肉质的研究。影响肌肉品质的因子有很多，其中包括畜禽的种类、大小、饲料品质这些原因都可以影响肌肉的组织纤维、胶原质、液体、酶的生物学特性，其中肌纤维的形成生长规律及其阶段中相关基因的调控扮演着十分重要的角色。
另外，随着最近对肌肉发育及其调控机理的认识愈来愈深入，我们发现，肌细胞的分化都是由一系列转录因子（Pax3myoDmyoG、C/EBPPPAR SREBP）顺序调控的结果，其基本调控的过程已基本得到发现与认知。而生肌因子MyoD基因在肌肉的产生中起到了关键的调控作用，可激活睡眠状态的肌肉里的特殊基因，并使其与肌肉特有的增强子协同帮助机体进行转录【1】。肌细胞生成素( myogenin , MyoG) 是生肌调节因子 MRFs( MyoD、MyoG、Myf5和 MRF4) 家族的一个成员，它能够控制成肌细胞融合的开始与结束,促进成肌细胞数目增加，使单核成肌细胞演变为多核的肌纤维。因此被认为在 MyoD 家族中拥有难以代替的地位【2】。国内外研究对鸡肌肉生长的调整与控制研究也取得了较多的进步，发现了很多与具有联系肌肉发育功能的基因。这些工作为本项目研究取得重大突破提供了理论基础。
另外，许多的研究发现，畜禽的肌肉品质与其肌肉组织学特性有显著的相关性，特别是肌纤维密度。肌纤维直径对肌肉品质的影响非常显著，而肌纤维特性大多是数量性状，一般受微效多基因控制【3】。一般情况下肌纤维密度越高，其肌纤维直径越小，二者呈现出负相关的联系。李同树等（2004）【4】通过肌纤维密度和直径对7个不同鸡种的嫩度进行评定。结果显示，虽然排序不同，但是两个指标均能区分鸡种间嫩度的差异。与剪切值、胶原蛋白、嫩度对比，肌纤维密度评定结果差异较大，而肌纤维直径评定结果却比较相似，说明用肌纤维直径评定嫩度精确性高于肌纤维密度，而且关于两个指标在肌肉嫩度中的作用大小，初步判定肌纤维直径作用大于肌纤维密度。有研究发现，肌纤维直径增大，白肌纤维增多而红肌纤维减少是形成 PSE 肉的组织学基础。【5】
20世纪80年代末至今，内地对于优质肌肉的需求量越来越高，这一情况刺激了科研院所和企业纷纷参与到优质肉鸡育种的队伍中。【6】然而，目前对于优质鸡的概念以及理解还不够透彻，至今都还没有一个统一明确的定义。众多研究者认为应该从血统、外貌、肉品质、屠宰年龄、上市体重、社会消费习惯和市场接受程度等角度综合考虑。王书恩，王秋梅（2004）定义如下：总的来说，优质鸡是中国家鸡的一个代名词【7】。王光瑛，李昂（2002）报道：优质鸡的优质受风味及其影响物质如一些脂肪酸、社会风俗习惯、肉的构造等因素影响【8】。另外有研究报道：优质鸡是相对于生长快速的肉用型鸡而言，优质鸡的概念首先是指肉的品质，优质鸡是没有快大鸡杂交的适时屠宰、肉质鲜嫩的地方鸡种【9】。
不管何种定义或者是描述，优质鸡的含义已基本了然。优质鸡应该是指在饲养到一定日龄而肉质特别鲜美、风味独特的肉鸡品种。而肉质与肌纤维有紧密联系，肌纤维的数目能够影响肉的品质。肌纤维数量在动物出生前就已基本稳定,肌肉的生长只是肌纤维的伸长和加粗的结果, 纤维数量保持不变。根据遗传相关系数和众多实验研究的结果, 细小肌纤维的数目越多, 肉品质就越好。因此,国内外许多研究者致力于肌纤维的研究。研究基因对肌纤维的发育规律的影响，既可以为肉质性状的研究提供帮助，又能给提高鸡肉肉质的研究提供理论基础。有利于更深入地研究肌纤维的生长发育规律，为发育生物学的研究提供有益的参考。
本研究选取台湾红标土鸡和白羽鸡为实验素材,对胚胎期的胸肌、腿肌肌纤维的发育规律进行研究;并且采用PCR技术分析了生肌调节因子——生肌决定因子( myogenic determining factor，MyoD) 、肌细胞生成素( myogenin，MyoG) 、生肌因子5( myogenic factor 5，Myf5)，在白羽鸡和红标鸡胚胎发育不同时期的胸肌、腿肌中的表达规律；并通过分析不同胚龄肌纤维的类型与数量，研究品种间胚胎期肌纤维发育的差异，为进一步深入研究胚胎期肌肉发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据。
材料与方法
1.1材料
1.1.1 实验材料
本实验所需材料选取种蛋200枚，编号同批孵化。孵化温度37摄氏度，湿度70%，分别于9、12、15、18、20胚龄时照蛋检验并随机选取正常发育的胚蛋15枚，进行胸肌与腿肌部分的采样。
1.1.2 实验试剂
（由南京农大动科学院杜文兴实验组提供） Trizol试剂；氯仿；异丙醇；乙醇；甲醛；石蜡；苏木精染剂；伊红染剂；PBS；血清；抗体；DAPI；石蜡；蔗糖等
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