载铜凹凸棒黏土对鸡白痢沙门氏菌病预防效果的研究
：【目的】凹凸棒粘土不仅具有吸附有害菌、毒素的作用，而且能促进肠黏膜的恢复和保护。铜离子本身就有杀菌作用。故该试验研究载铜凹凸棒粘土对鸡白痢沙门氏菌病的预防效果。【方法】将100只一日龄鸡随机分成五组，空白组，感染组，10g预防组，5g预防组，0.05%氯霉素组。感染组于七日龄灌胃菌液，并饲喂正常普通饲料；10g预防组于七日龄灌胃菌液，并饲喂10g载铜凹凸棒粘土混合饲料；5g预防组于七日龄灌胃菌液，并饲喂5g载铜凹凸棒粘土混合饲料；0.05%氯霉素组于七日龄灌胃菌液，并饲喂0.05%氯霉素混合饲料。记录发病率、死亡率、保护率等，平板法测定盲肠和肝脏带菌情况，称重法测定生产性能，常规切片观察空肠组织形态。【结果】预防试验结果表明，10g预防组死亡率最低，肝脏、盲肠带菌数量明显减少，且其盲肠带菌数目显著比感染组低(P<0.05)。两组于前期的平均终重、平均日增重虽然差异不显著，但10g预防组的料肉比却明显降低。后期10g预防组的平均日增重明显比感染组高，其料肉比仍明显比感染组低。这说明载铜凹凸棒粘土缓解了沙门氏菌导致的生长缓慢。10g预防组的肠绒毛高度显著高于其他组（P<0.05），且比正常组还高。10g预防组、5g预防组肠绒毛高度与隐窝深度的比值也是显著比0.05%氯霉素组、感染组大（P<0.05）。10g载铜凹凸棒粘土可提高肠绒毛高度，改善空肠形态。 【结论】10g载铜凹凸棒粘土对鸡白痢沙门氏菌有预防作用，能降低盲肠、肝脏带菌数目，缓解了生长缓慢，提高肠绒毛高度，改善空肠形态。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
1材料与方法2
1.1试验材料 2
1.1.1菌种2
1.1.2凹凸棒粘土2
1.1.3实验动物2
1.2试验方法 2
1.2.1沙门氏菌悬液的制备2
1.2.2载铜凹凸棒粘土的制2
1.2.3攻毒剂量的确定2
1.2.4预防试验3
1.2.5检测指标3
1.3饲养管理4
1.4数据处理与分析4
2结果与分析4
2.1载铜凹凸棒粘土4
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
2.2攻毒剂量4
2.3预防实验4
2.3.1预防相关指标的测定4
2.3.2盲肠鸡白痢沙门氏菌的测定4
2.3.3生产性能的测定5
2.3.4小肠组织形态5
3讨论 6
3.1载铜凹凸棒粘土对鸡白痢沙门氏菌病的预防治疗及肠道沙门氏菌的测定6
3.2载铜凹凸棒粘土对鸡生长性能的影响6
3.3载铜凹凸棒粘土对小肠绒毛影响6
4结论7
致谢7
参考文献7
载铜凹凸棒黏土对鸡白痢沙门氏菌病预防效果的研究
引言
引言：鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的常见传染病之一，主要危害鸡和火鸡，以出壳后2周内的雏鸡为主。雏鸡常常呈现急性败血症，发病率和死亡率都比较高，严重危害养鸡业。雏鸡发病后主要表现为精神萎顿，排白色浆糊状粪便，肛门附近常沾有石灰样粪便，排便困难；成年鸡多为慢性或隐性感染，严重影响生长和产蛋量，给经济严重损失。目前，对鸡白痢沙门氏菌病的防治措施，国内外主要采用抗生素和其他抗菌药物。但抗生素和抗菌药物的长期使用，导致药物残留和细菌耐药、耐药基因转移［1］等不良后果。因此寻找一种可以辅助抗生素，甚至可以代替抗生素有效杀灭并抑制鸡白痢沙门氏菌感染的药物迫在眉睫。凹凸棒粘土（attapulgite clay）制剂是一种安全无毒的天然药材［2］，无致癌性[3]，并且具有良好的离子交换特性［4］、物理吸附性、水化性、热稳定性等特性。由于凹凸棒粘土表面积大以及有很好的分散性能，可以对消化道内的胆酸胆盐、有害菌以及其产生的毒素有显著的吸附作用［5］，此外还可以提高消化道局部免疫作用，促进肠黏膜的修复与保护［6,7］。早在几千年前，人们就发现铜的杀菌作用［8］。在Faundez的研究中发现铜可以抑制沙门氏菌以及大肠杆菌的生长［9］。以非金属矿为载体，加载一些金属离子如Ag+、Cu+、Zn+制备的无机抗菌剂具有良好的抗菌性能［10］，如载铜蒙脱石对微生物具有吸附和抑制作用［11］。当凹凸棒粘土负载金属阳离子后，金属阳离子在动物体内释放出来，便可以达到有效的抑菌杀菌效果［12］。本实验通过人工诱导鸡感染鸡白痢沙门氏菌，然后用载铜凹凸棒粘土与饲料混合物进行预防，观察临床疗效，分析其对肠道鸡白痢沙门氏菌带菌情况以及组织形态的影响，以期得到一种可以代替抗生素有效杀死鸡白痢沙门氏菌的药物。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 菌种 购于国家兽医微生物菌种保藏中心，编号CVCC1795
1．1．2 凹凸棒黏土 购自江苏神力特生物技术有限公司
1．1．3 实验动物 试验用1日龄AA肉鸡，购于南京汤泉鸡场。
1．2 试验方法
1．2．1 沙门氏菌悬液的制备 将鸡白痢沙门菌先用肉汤复苏，再接种于10mLLB 液体培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl5g/L) ，摇床上180r/min，37 ℃培养13h。菌液5000 r/min离心3min，用灭菌生理盐水洗涤、重悬、离心2次后，在100mL的锥形瓶用灭菌生理盐水稀释成50mL的沙门氏菌悬液，浓度约6.5×108CFU/mL。
1．2．2 载铜凹凸棒黏土的制备 参考侯羽浓［13］所述方法改进：将凹凸棒粘土于烘箱105℃烘烤2h，然后将凹土加入到0.15 mol/L硝酸铜盐溶液，固液比1∶20，在95℃恒温振荡器中200 r/ min 振荡6h进行离子交换反应;静置后弃上清液，用蒸馏水洗涤至滤液溶液无蓝色看到。105℃干燥箱中干至恒重，研磨，过200目筛得到载铜凹凸棒粘土。Cu+含量的测定采用侯羽浓［13］所述方法，微波消解后用电感耦合等离子体发射光谱仪测定。
1．2．3 攻毒剂量的确定 试验用1日龄AA肉鸡，购于南京汤泉鸡场。随机分成5组,10只/组，等到七日龄时，用制成的鸡白痢沙门氏菌悬液进行灌胃,每只鸡用量各组分别为0、 0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml ,15天后统计死亡数和发病率,并由此确定攻毒剂量。
1．2．4 预防试验 将100只1日龄雏鸡，分为5组，每组20只。不灌胃菌液只饲喂饲料，为空白组；灌胃菌液，饲喂饲料，为感染组；灌胃菌液，饲料和10g的载铜凹土混合饲喂，为10g预防组；灌胃菌液，饲料和5g的载铜凹土混合饲喂，为5g预防组；灌胃菌液，饲料和0.05%氯霉素混合饲喂，为0.05%氯霉素组。从一日龄起，开始按照分组饲喂，连续饲喂15天。七日龄时，感染和预防组共40只鸡均灌胃沙门氏菌为6.5×108CFU/mL。
1．2．5 检测指标
1.2.5.1预防效果观察
发病率 凡在试验中，临床观察出现典型症状的，均判为发病;根据发病鸡数，计算发病率。
死亡率 凡在试验中，,临床观察出现典型症状并死亡剖检发现脏器有典型病理变化的，均判为感染死亡；根据死亡鸡数，计算死亡率。
1.2.5.2生产性能的测定
每天记载每组鸡的采食量，并且在1、15、23日龄，空腹记载每组体重。计算平均终重，平均日增重，平均饲料消耗，料肉比。
1.2.5.3盲肠鸡白痢沙门氏菌的测定
试验鸡15、23、31日龄时，进行采样，无菌将肝脏、盲肠放到高压5mlEP管中待测。采用平板计数法，在超净台内，无菌操作取出盲肠中的全部内容物，称取0.1g，放入无菌10ml试管中，稀释后涂板， 37°C培养24h，培养结束后计数,以每克盲肠内容物所含细菌数量的对数Ig (CFU/m)来表示。此外，将盲肠内容物和肝脏接种于SS琼脂培养基上进行鉴别培养。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words2
引言2
1材料与方法2
1.1试验材料 2
1.1.1菌种2
1.1.2凹凸棒粘土2
1.1.3实验动物2
1.2试验方法 2
1.2.1沙门氏菌悬液的制备2
1.2.2载铜凹凸棒粘土的制2
1.2.3攻毒剂量的确定2
1.2.4预防试验3
1.2.5检测指标3
1.3饲养管理4
1.4数据处理与分析4
2结果与分析4
2.1载铜凹凸棒粘土4
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
2.2攻毒剂量4
2.3预防实验4
2.3.1预防相关指标的测定4
2.3.2盲肠鸡白痢沙门氏菌的测定4
2.3.3生产性能的测定5
2.3.4小肠组织形态5
3讨论 6
3.1载铜凹凸棒粘土对鸡白痢沙门氏菌病的预防治疗及肠道沙门氏菌的测定6
3.2载铜凹凸棒粘土对鸡生长性能的影响6
3.3载铜凹凸棒粘土对小肠绒毛影响6
4结论7
致谢7
参考文献7
载铜凹凸棒黏土对鸡白痢沙门氏菌病预防效果的研究
引言
引言：鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的常见传染病之一，主要危害鸡和火鸡，以出壳后2周内的雏鸡为主。雏鸡常常呈现急性败血症，发病率和死亡率都比较高，严重危害养鸡业。雏鸡发病后主要表现为精神萎顿，排白色浆糊状粪便，肛门附近常沾有石灰样粪便，排便困难；成年鸡多为慢性或隐性感染，严重影响生长和产蛋量，给经济严重损失。目前，对鸡白痢沙门氏菌病的防治措施，国内外主要采用抗生素和其他抗菌药物。但抗生素和抗菌药物的长期使用，导致药物残留和细菌耐药、耐药基因转移［1］等不良后果。因此寻找一种可以辅助抗生素，甚至可以代替抗生素有效杀灭并抑制鸡白痢沙门氏菌感染的药物迫在眉睫。凹凸棒粘土（attapulgite clay）制剂是一种安全无毒的天然药材［2］，无致癌性[3]，并且具有良好的离子交换特性［4］、物理吸附性、水化性、热稳定性等特性。由于凹凸棒粘土表面积大以及有很好的分散性能，可以对消化道内的胆酸胆盐、有害菌以及其产生的毒素有显著的吸附作用［5］，此外还可以提高消化道局部免疫作用，促进肠黏膜的修复与保护［6,7］。早在几千年前，人们就发现铜的杀菌作用［8］。在Faundez的研究中发现铜可以抑制沙门氏菌以及大肠杆菌的生长［9］。以非金属矿为载体，加载一些金属离子如Ag+、Cu+、Zn+制备的无机抗菌剂具有良好的抗菌性能［10］，如载铜蒙脱石对微生物具有吸附和抑制作用［11］。当凹凸棒粘土负载金属阳离子后，金属阳离子在动物体内释放出来，便可以达到有效的抑菌杀菌效果［12］。本实验通过人工诱导鸡感染鸡白痢沙门氏菌，然后用载铜凹凸棒粘土与饲料混合物进行预防，观察临床疗效，分析其对肠道鸡白痢沙门氏菌带菌情况以及组织形态的影响，以期得到一种可以代替抗生素有效杀死鸡白痢沙门氏菌的药物。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 菌种 购于国家兽医微生物菌种保藏中心，编号CVCC1795
1．1．2 凹凸棒黏土 购自江苏神力特生物技术有限公司
1．1．3 实验动物 试验用1日龄AA肉鸡，购于南京汤泉鸡场。
1．2 试验方法
1．2．1 沙门氏菌悬液的制备 将鸡白痢沙门菌先用肉汤复苏，再接种于10mLLB 液体培养基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl5g/L) ，摇床上180r/min，37 ℃培养13h。菌液5000 r/min离心3min，用灭菌生理盐水洗涤、重悬、离心2次后，在100mL的锥形瓶用灭菌生理盐水稀释成50mL的沙门氏菌悬液，浓度约6.5×108CFU/mL。
1．2．2 载铜凹凸棒黏土的制备 参考侯羽浓［13］所述方法改进：将凹凸棒粘土于烘箱105℃烘烤2h，然后将凹土加入到0.15 mol/L硝酸铜盐溶液，固液比1∶20，在95℃恒温振荡器中200 r/ min 振荡6h进行离子交换反应;静置后弃上清液，用蒸馏水洗涤至滤液溶液无蓝色看到。105℃干燥箱中干至恒重，研磨，过200目筛得到载铜凹凸棒粘土。Cu+含量的测定采用侯羽浓［13］所述方法，微波消解后用电感耦合等离子体发射光谱仪测定。
1．2．3 攻毒剂量的确定 试验用1日龄AA肉鸡，购于南京汤泉鸡场。随机分成5组,10只/组，等到七日龄时，用制成的鸡白痢沙门氏菌悬液进行灌胃,每只鸡用量各组分别为0、 0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml ,15天后统计死亡数和发病率,并由此确定攻毒剂量。
1．2．4 预防试验 将100只1日龄雏鸡，分为5组，每组20只。不灌胃菌液只饲喂饲料，为空白组；灌胃菌液，饲喂饲料，为感染组；灌胃菌液，饲料和10g的载铜凹土混合饲喂，为10g预防组；灌胃菌液，饲料和5g的载铜凹土混合饲喂，为5g预防组；灌胃菌液，饲料和0.05%氯霉素混合饲喂，为0.05%氯霉素组。从一日龄起，开始按照分组饲喂，连续饲喂15天。七日龄时，感染和预防组共40只鸡均灌胃沙门氏菌为6.5×108CFU/mL。
1．2．5 检测指标
1.2.5.1预防效果观察
发病率 凡在试验中，临床观察出现典型症状的，均判为发病;根据发病鸡数，计算发病率。
死亡率 凡在试验中，,临床观察出现典型症状并死亡剖检发现脏器有典型病理变化的，均判为感染死亡；根据死亡鸡数，计算死亡率。
1.2.5.2生产性能的测定
每天记载每组鸡的采食量，并且在1、15、23日龄，空腹记载每组体重。计算平均终重，平均日增重，平均饲料消耗，料肉比。
1.2.5.3盲肠鸡白痢沙门氏菌的测定
试验鸡15、23、31日龄时，进行采样，无菌将肝脏、盲肠放到高压5mlEP管中待测。采用平板计数法，在超净台内，无菌操作取出盲肠中的全部内容物，称取0.1g，放入无菌10ml试管中，稀释后涂板， 37°C培养24h，培养结束后计数,以每克盲肠内容物所含细菌数量的对数Ig (CFU/m)来表示。此外，将盲肠内容物和肝脏接种于SS琼脂培养基上进行鉴别培养。
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