山羊pgc1α基因过表达载体的构建与鉴定
PGC-1α是主要的转录辅助因子，能调控线粒体的功能，决定细胞的命运。为了研究其作用机理，本研究以山羊卵巢组织为材料，用RT-PCR法克隆PGC-1α基因的cDNA序列后构建过表达载体，并通过不同的细胞进行鉴定。结果表明通过RT-PCR法成功克隆了山羊PGC-1α基因的cDNA序列，长度为2394bp。将山羊PGC-1α基因亚克隆至pEX-4表达载体上（4773bp），成功构建了山羊PGC-1α基因真核过表达载体pEX-4-PGC-1α，采用脂质体法将其转染至293细胞、山羊耳成纤维细胞和颗粒细胞中，48h后实时荧光定量PCR检测发现，转染组PGC-1α基因的表达量显著高于对照组（P＜0.05）。本试验成功的构建了PGC-1α过表达载体，为后续研究PGC-1α基因的功能奠定了基础。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Keywords 3
引言(((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((3
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.2 主要仪器 4
1.3 主要试剂 4
1.4 实验方法 4
1.4.1 Trizol 法提取山羊卵巢组织RNA 4
1.4.2 反转录合成cDNA 4
1.4.3 PGC1α cDNA的扩增与克隆 5
1.4.4 过表达载体的构建 5
1.4.5 细胞培养 5
1.4.6 细胞转染 6
1.4.7 细胞总RNA的提取 6
1.4.8 目的基因的PCR验证 6
1.4.9 荧光定量PCR检测 6
1.4.10数据统计 7
2 结果与分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
析 7
2.1 PGC1α过表达载体的构建 7
2.2 荧光显微镜观察转染细胞中GFP基因的表达 7
2.3 PGC1α基因引物的鉴定 8
2.4 荧光定量PCR检测 9
3 讨论 10
致谢 10
参考文献 11
山羊PGC1α基因过表达载体的构建与鉴定
动物科技学院学生：李雅芹
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Keywords 3
引言(((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((3
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.2 主要仪器 4
1.3 主要试剂 4
1.4 实验方法 4
1.4.1 Trizol 法提取山羊卵巢组织RNA 4
1.4.2 反转录合成cDNA 4
1.4.3 PGC1α cDNA的扩增与克隆 5
1.4.4 过表达载体的构建 5
1.4.5 细胞培养 5
1.4.6 细胞转染 6
1.4.7 细胞总RNA的提取 6
1.4.8 目的基因的PCR验证 6
1.4.9 荧光定量PCR检测 6
1.4.10数据统计 7
2 结果与分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
析 7
2.1 PGC1α过表达载体的构建 7
2.2 荧光显微镜观察转染细胞中GFP基因的表达 7
2.3 PGC1α基因引物的鉴定 8
2.4 荧光定量PCR检测 9
3 讨论 10
致谢 10
参考文献 11
山羊PGC1α基因过表达载体的构建与鉴定
动物科技学院学生：李雅芹
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