某地区两家宠物医院犬细小病毒的分离鉴某地区两家宠物医院犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析(附件)【字数：8863】
1在南京市两家博研宠物医院出现症状为发热、血便、虚弱或临床检测为疑似为细小病毒（Canine Parvovirus type 2, CPV-2）感染的病犬中，采肛拭子40份。用猫肾传代细胞（F81）接毒观察病变，40个样品中有19个样品出现病变，将病变细胞提取DNA，进行PCR和凝胶电泳之后将出现阳性条带的6个样品送至生工生物工程（上海）股份有限公司，测序并比对后结果证明该6个样品均为CPV-2a亚型，将分离到并测定的序列用MEGA 5软件进行遗传进化分析，结果显示在南京博研宠物医院附近地区的犬细小病毒基因型并没有发生突变，该地区的犬细小病毒仍在可控范围之内。
目 录
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1.国内外研究概况 1
2.本研究的目的 2
宠物医院采样学习 2
1.材料 2
2.实验方法步骤 3
3.实验结果 3
犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析 4
1.实验材料 4
1.1.主要实验仪器 4
1.2.其他主要材料 4
1.3.细胞 4
1.4.主要试剂 4
2.实验步骤 4
2.1.样品的过滤分离 4
2.2.细胞传代和接毒 5
2.2.1.细胞的培养以及传代 5
2.2.1.1.复苏 5
2.2.1.2.传代 5
2.3.提取DNA 5
2.4.DNA浓度检测 6
2.5.引物以及PCR反应条件的设计 6
2.6.PCR检测 6
2.7.凝胶电泳 7
2.8.高保真酶PCR 7
2.9.凝胶电泳 7
2.10.送测 7
2.11.遗传进化分析 7
3.实验结果 8
3.1.细胞病变观察 8
3.2.PCR检测结果 10
3.3.测序结果及进化分析 10
3.3.1.测序结果 10
3.3.2.1.序列对比 11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
3.3.2.2.进化树 11
讨论 13
1.小结 13
2.不足之处 14
3.研究意义 14
致谢 14
参考文献 15
附录 16
南京地区两家宠物医院犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析
动物医学专业学生 章孝天
指导教师 粟硕
The separation，identification and genetic analysis of the Canine Parvovirus type 2 of two pet hospitals in Nanjing area
Student majoring in veterinary medicine : Zhang Xiaotian
Tutor: Su Shuo
Abstract: Forty cloacal swabs from some sick dogs with clinical manifestations of elevated body temperature, blood stools, weakness and clinical examinations that were suspected of Canine Parvovirus type 2（CPV2) were collected from two BoYan pet hospitals. Then the viruses cultured in Feline kidney 81 cell (F81) to observe the cytopathic effect (CPE), 19 samples appeared lesions in 40 samples. Then extracting the DNA from cytopathic cells, with the experiment of PCR and gel electrophoresis and then six positive strip samples were sent to the Sangon Biotech (Shanghai) sequencing company. The sequencing results revealed that there were 6 sequences belong to CPV2a, then using the sequencing results and software MEGA5 to analyze the genetic evolution. Results shown that there were no mutation of Canine Parvovirus genes nearby BoYan pet hospitals, virus infection is still under control.
Keywords: Canine Parvovirus type 2; separation; identification; evolutionary analysis
引言
1.国内外研究概况
犬细小病毒病是一种以肠道出血发炎或心肌炎为主要临床特征的犬易感染的烈性传染病 [1]。此病毒传染性强、感染迅速、传播范围广、从症状出现到致死时间短、现有治疗手段治愈率低，对我国犬养殖业以及宠物行业造成了巨大危害，并且带来了很大的经济损失，大规模的流行病学调查和科学研究也客观存在一定的难度。
犬细小病毒（Canine parvovirus type 2, CPV2）最早在1978年，由澳大利亚的Kelly和加拿大的Thomson从患肠炎的病犬粪便中分离获得，是世界上首次发现CPV2 [2]。1982年，我国学者梁士哲在肠胃出血的患病犬中发现了CPV2，首次在中国大陆疑似发现犬细小病毒的流行。而在1983年，徐汉坤等人确定了此病毒在我国开始正式流行。2003年，中国人民解放军军需大学军事兽医研究所谢之景、夏咸柱等，从全国各个地区患肠炎的犬只中收集25份粪料，并且分离出10株犬细小病毒，由此表明犬细小病毒开始在我国广泛流行 [3]。
目 录
Abstract 1
Keywords 1
引言 1
1.国内外研究概况 1
2.本研究的目的 2
宠物医院采样学习 2
1.材料 2
2.实验方法步骤 3
3.实验结果 3
犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析 4
1.实验材料 4
1.1.主要实验仪器 4
1.2.其他主要材料 4
1.3.细胞 4
1.4.主要试剂 4
2.实验步骤 4
2.1.样品的过滤分离 4
2.2.细胞传代和接毒 5
2.2.1.细胞的培养以及传代 5
2.2.1.1.复苏 5
2.2.1.2.传代 5
2.3.提取DNA 5
2.4.DNA浓度检测 6
2.5.引物以及PCR反应条件的设计 6
2.6.PCR检测 6
2.7.凝胶电泳 7
2.8.高保真酶PCR 7
2.9.凝胶电泳 7
2.10.送测 7
2.11.遗传进化分析 7
3.实验结果 8
3.1.细胞病变观察 8
3.2.PCR检测结果 10
3.3.测序结果及进化分析 10
3.3.1.测序结果 10
3.3.2.1.序列对比 11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
3.3.2.2.进化树 11
讨论 13
1.小结 13
2.不足之处 14
3.研究意义 14
致谢 14
参考文献 15
附录 16
南京地区两家宠物医院犬细小病毒的分离鉴定及遗传进化分析
动物医学专业学生 章孝天
指导教师 粟硕
The separation，identification and genetic analysis of the Canine Parvovirus type 2 of two pet hospitals in Nanjing area
Student majoring in veterinary medicine : Zhang Xiaotian
Tutor: Su Shuo
Abstract: Forty cloacal swabs from some sick dogs with clinical manifestations of elevated body temperature, blood stools, weakness and clinical examinations that were suspected of Canine Parvovirus type 2（CPV2) were collected from two BoYan pet hospitals. Then the viruses cultured in Feline kidney 81 cell (F81) to observe the cytopathic effect (CPE), 19 samples appeared lesions in 40 samples. Then extracting the DNA from cytopathic cells, with the experiment of PCR and gel electrophoresis and then six positive strip samples were sent to the Sangon Biotech (Shanghai) sequencing company. The sequencing results revealed that there were 6 sequences belong to CPV2a, then using the sequencing results and software MEGA5 to analyze the genetic evolution. Results shown that there were no mutation of Canine Parvovirus genes nearby BoYan pet hospitals, virus infection is still under control.
Keywords: Canine Parvovirus type 2; separation; identification; evolutionary analysis
引言
1.国内外研究概况
犬细小病毒病是一种以肠道出血发炎或心肌炎为主要临床特征的犬易感染的烈性传染病 [1]。此病毒传染性强、感染迅速、传播范围广、从症状出现到致死时间短、现有治疗手段治愈率低，对我国犬养殖业以及宠物行业造成了巨大危害，并且带来了很大的经济损失，大规模的流行病学调查和科学研究也客观存在一定的难度。
犬细小病毒（Canine parvovirus type 2, CPV2）最早在1978年，由澳大利亚的Kelly和加拿大的Thomson从患肠炎的病犬粪便中分离获得，是世界上首次发现CPV2 [2]。1982年，我国学者梁士哲在肠胃出血的患病犬中发现了CPV2，首次在中国大陆疑似发现犬细小病毒的流行。而在1983年，徐汉坤等人确定了此病毒在我国开始正式流行。2003年，中国人民解放军军需大学军事兽医研究所谢之景、夏咸柱等，从全国各个地区患肠炎的犬只中收集25份粪料，并且分离出10株犬细小病毒，由此表明犬细小病毒开始在我国广泛流行 [3]。
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