致病性大肠杆菌的耐药表型及四环素类耐药基因的调查
：大肠杆菌病是一种在畜禽养殖业中最常见的传染病。近年来，随着四环素类、氟喹诺酮类等药物在临床的广泛应用，大肠杆菌对这些药物的耐药性迅速增长，并且出现对多种抗生素均耐药的多重耐药现象，因此本研究主要利用从青海和江苏分离出的72株致病性大肠杆菌，通过药敏纸片法及耐药基因的PCR检测，对大肠杆菌对四环素类药物的耐药表型和耐药基因情况进行分析。药敏试验结果显示试验菌株对氨苄西林、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、多西环素均表现出比较高的耐药性(＞40%)，对头孢噻肟耐受性比较低（＜14%）。耐药基因检测结果显示四环素类耐药基因tet（A）、tet（B）和tet（M）均有比较高的检出率，分别为68.1%、69.4%、37.5%，可以看出该72株致病性大肠杆菌对试验所用的四环素类药物的耐药性比较高，耐药基因流行现象十分普遍，因此本研究具有一定的实际应用价值。本研究大肠杆菌的耐药情况及机制提供一定的数据支持，为临床用药提供理论指导。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1菌株 2
1.2抗生素 3
1.3培养基3
1.4试剂与器材3
1.5方法3
1.5.1菌液的准备3
1.5.2 MHA琼脂的制备3
1.5.3药敏试验3
1.5.4引物设计 4
1.5.5四环素类耐药基因的检测 4
2结果分析 5
2.1药敏实验结果 5
2.2 耐药基因检测结果 8
2.2.1四环素类耐药基因检测结果 8
2.2.2不同地区菌株四环素类耐药基因分析 11
3讨论11
致谢12
参考文献13
致病性大肠杆菌的耐药表型及四环素类耐药基因的调查
引言
1885年，德国科学家Escherich发现了大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）， 此后大肠杆菌即用这位发现者的名字命名[1]。大部分大肠杆菌属于哺乳动物和禽类肠道内的正常菌群，少数具有
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
致病性的称为致病性大肠杆菌 (Pathogenic E.coli)。根据毒力因子、发病机制及病变的不同，大肠杆菌又可以分为肠道致病性大肠杆菌(Intestinal Pathogenic E.coli)和肠道外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic E.coli，ExPEC),肠道外致病性大肠杆菌包括尿道致病性大肠杆菌(Uropathogenic E.coli，UPEC)、新生儿脑膜炎大肠杆菌(Nconatalmeningitis E.coli，NMEC)和禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic E.coli，APEC)[2]。大肠杆菌病既可以单一感染，又可与多种疾病混合感染或继发感染，因此可以引起极高的死亡率，给养殖业带来重大损失[3]。疾病危害主要表现为肝周炎、卵黄性腹膜炎、大肠杆菌性败血症以及心包炎等，大肠杆菌还可以通过污染鸡蛋、蛋制品以及通过耐药性的传播进而威胁人类健康[4]。近年来，耐药菌株的增加以及耐药谱的不断扩大已经成为大肠杆菌病难以控制的一大原因[5]。各项研究表明，致病性大肠杆菌对四环素类和氟喹诺酮类药物有比较高的耐药性[6,7,8]，如刘书亮[9]等对动物性食品中分离的319株大肠杆菌进行药物敏感性检验，结果显示这些大肠杆菌对喹诺酮类的耐药率均大于95%；周洪艳[10]对从哈尔滨某鸡场分离的大肠杆菌用微量稀释法测定了18种抗生素的最小抑菌浓度和14个耐药基因，研究结果表明所有菌株对12种抗生素都有很强的耐药性，其中最敏感的药物是喹诺酮类的环丙沙星药物，并且从大肠杆菌中检测出tetA、tetC、ermC、blaCTXM、intI和blaNDM1共6个耐药基因，检出含tetA的阳性菌株最多，含blaNDM1阳性菌株最少；王冠玉[11]等对分离自贵州的鸡源大肠杆菌耐药性分析显示，分离菌对9 种抗生素表现耐药；邓春朋[12]用药敏纸片法对从13个不同规模化鸡场分离的135株鸡源大肠杆菌进行药敏实验，结果表明对氟喹诺酮类的环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率较高。因次，深入研究致病性大肠杆菌的耐药性，获得更好的药物治疗效果，具有重要的临床用药指导意义。本文主要从致病性大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况、相关的耐药基因分布情况及研究进展进行分析论述。
1 材料与方法
1.1菌株
由实验室保存的从青海和江苏患病动物分离纯化出的致病性大肠杆菌72株（表1），标记编号后在4℃环境下保存待用。
表1 72株致病性大肠杆菌编号
Table 1 The number of 72 plants Pathogenic Escherichia coli
来源
菌株编号
来源
菌株编号
猪
（江苏）
Q17
Q88
Q107
Q142
羊
（青海）
CCVC
1530
LYG276
SEC799
HAB2
Q23
Q89
Q118
Q143
CCVC
1531
SEC204
XH246
HAB3
Q38
Q91
Q127
Q147
NT30
SEC263
XZ57
RD68
Q57
Q92
Q129
Q148
NT45
SEC330
XZ224
JJ132
Q60
Q94
Q130
Q149
NT189
SEC367
YZ213
JJ832
Q61
Q95
Q136
Q150
NT757
SEC468
YZ343
YZ112
Q63
Q96
Q137
Q152
LYG35
SEC494
YZ350
YZ212
Q75
Q98
Q138
Q155
LYG136
SEC506
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1菌株 2
1.2抗生素 3
1.3培养基3
1.4试剂与器材3
1.5方法3
1.5.1菌液的准备3
1.5.2 MHA琼脂的制备3
1.5.3药敏试验3
1.5.4引物设计 4
1.5.5四环素类耐药基因的检测 4
2结果分析 5
2.1药敏实验结果 5
2.2 耐药基因检测结果 8
2.2.1四环素类耐药基因检测结果 8
2.2.2不同地区菌株四环素类耐药基因分析 11
3讨论11
致谢12
参考文献13
致病性大肠杆菌的耐药表型及四环素类耐药基因的调查
引言
1885年，德国科学家Escherich发现了大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）， 此后大肠杆菌即用这位发现者的名字命名[1]。大部分大肠杆菌属于哺乳动物和禽类肠道内的正常菌群，少数具有
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致病性的称为致病性大肠杆菌 (Pathogenic E.coli)。根据毒力因子、发病机制及病变的不同，大肠杆菌又可以分为肠道致病性大肠杆菌(Intestinal Pathogenic E.coli)和肠道外致病性大肠杆菌(Extraintestinal Pathogenic E.coli，ExPEC),肠道外致病性大肠杆菌包括尿道致病性大肠杆菌(Uropathogenic E.coli，UPEC)、新生儿脑膜炎大肠杆菌(Nconatalmeningitis E.coli，NMEC)和禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic E.coli，APEC)[2]。大肠杆菌病既可以单一感染，又可与多种疾病混合感染或继发感染，因此可以引起极高的死亡率，给养殖业带来重大损失[3]。疾病危害主要表现为肝周炎、卵黄性腹膜炎、大肠杆菌性败血症以及心包炎等，大肠杆菌还可以通过污染鸡蛋、蛋制品以及通过耐药性的传播进而威胁人类健康[4]。近年来，耐药菌株的增加以及耐药谱的不断扩大已经成为大肠杆菌病难以控制的一大原因[5]。各项研究表明，致病性大肠杆菌对四环素类和氟喹诺酮类药物有比较高的耐药性[6,7,8]，如刘书亮[9]等对动物性食品中分离的319株大肠杆菌进行药物敏感性检验，结果显示这些大肠杆菌对喹诺酮类的耐药率均大于95%；周洪艳[10]对从哈尔滨某鸡场分离的大肠杆菌用微量稀释法测定了18种抗生素的最小抑菌浓度和14个耐药基因，研究结果表明所有菌株对12种抗生素都有很强的耐药性，其中最敏感的药物是喹诺酮类的环丙沙星药物，并且从大肠杆菌中检测出tetA、tetC、ermC、blaCTXM、intI和blaNDM1共6个耐药基因，检出含tetA的阳性菌株最多，含blaNDM1阳性菌株最少；王冠玉[11]等对分离自贵州的鸡源大肠杆菌耐药性分析显示，分离菌对9 种抗生素表现耐药；邓春朋[12]用药敏纸片法对从13个不同规模化鸡场分离的135株鸡源大肠杆菌进行药敏实验，结果表明对氟喹诺酮类的环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率较高。因次，深入研究致病性大肠杆菌的耐药性，获得更好的药物治疗效果，具有重要的临床用药指导意义。本文主要从致病性大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况、相关的耐药基因分布情况及研究进展进行分析论述。
1 材料与方法
1.1菌株
由实验室保存的从青海和江苏患病动物分离纯化出的致病性大肠杆菌72株（表1），标记编号后在4℃环境下保存待用。
表1 72株致病性大肠杆菌编号
Table 1 The number of 72 plants Pathogenic Escherichia coli
来源
菌株编号
来源
菌株编号
猪
（江苏）
Q17
Q88
Q107
Q142
羊
（青海）
CCVC
1530
LYG276
SEC799
HAB2
Q23
Q89
Q118
Q143
CCVC
1531
SEC204
XH246
HAB3
Q38
Q91
Q127
Q147
NT30
SEC263
XZ57
RD68
Q57
Q92
Q129
Q148
NT45
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XZ224
JJ132
Q60
Q94
Q130
Q149
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Q63
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Q152
LYG35
SEC494
YZ350
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Q75
Q98
Q138
Q155
LYG136
SEC506
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