钩端螺旋体随机突变株构建方法
致病性钩端螺旋体(以下简称钩体)所引起的钩端体螺旋体病 （钩体病），是一种全世界范围内流行的人畜共患病。钩体病已发现百年，但其致病机制却尚未完全阐明。对钩体基因功能的诠释是了解钩体病致病机制十分重要，而构建缺失株是了解基因功能的主要方法。钩体虽为革兰氏阴性菌，但因其基因组的特殊性导致很难在钩体上进行定向缺失。利用转座子构建随机突变在许多细菌中被应用于筛选基因，因此，本研究的目的是建立钩体的随机突变株构建方法，为钩体基因功能的研究提供技术支持。具体方法是通过将带有转座子mariner的质粒pCjTKS2利用与大肠杆菌β2163接合的方法将其导入钩体，并通过PCR及测序筛选突变株。结果显示，筛选出阳性克隆，方法构建成功，接下来可为进一步进行钩体基因研究奠定基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1.引言 1
1.1钩端螺旋体的生物特性 2
1.2钩端螺旋体的分类 3
1.2.1钩端螺旋体的病原学分类 3
1.2.2钩端螺旋体的血清学分类 3
1.2.3钩端螺旋体的基因分类 4
1.3钩端螺旋体的培养特性 4
1.4钩端螺旋体的致病性 4
1.5钩端螺旋体病 5
1.5.1钩体病在动物中的流行情况 5
1.5.2动物钩体病的发病机制 6
1.5.3 钩体病对动物的危害 7
1.6钩端螺旋体病的诊断及治疗 8
2.材料与方法 8
2.1材料 8
2.1.1菌株 8
2.1.2试剂、耗材 9
2.1.3试剂的配制 10
2.2.实验方法 10
2.2.1大肠杆菌β2163感受态的制备 10
2.2.2质粒pCjTKS2和大肠杆菌β2163感受态细胞的转化 10
2.2.3阳性重组子的鉴定和测序 11
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
2.2.4转化后大肠杆菌β2163的培养 11
2.2.5大肠杆菌β2163菌株的适应性培养预实验 12
2.2.6钩端螺旋体的培养 12
2.2.7钩体突变株的构建 12
2.2.8钩体突变株的鉴定 12
3.实验结果 14
3.1大肠杆菌β2163菌株的培养结果 14
3.2大肠杆菌β2163阳性突变株的适应性培养预实验结果 14
3.3大肠杆菌β2163阳性突变株与钩体接和前的准备结果 15
3.4钩体突变株平板培养结果 16
3.5钩体突变株PCR扩增结果 17
4.讨论 18
致谢 18
参考文献 20
钩端螺旋体随机突变株的构建方法
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1.引言 1
1.1钩端螺旋体的生物特性 2
1.2钩端螺旋体的分类 3
1.2.1钩端螺旋体的病原学分类 3
1.2.2钩端螺旋体的血清学分类 3
1.2.3钩端螺旋体的基因分类 4
1.3钩端螺旋体的培养特性 4
1.4钩端螺旋体的致病性 4
1.5钩端螺旋体病 5
1.5.1钩体病在动物中的流行情况 5
1.5.2动物钩体病的发病机制 6
1.5.3 钩体病对动物的危害 7
1.6钩端螺旋体病的诊断及治疗 8
2.材料与方法 8
2.1材料 8
2.1.1菌株 8
2.1.2试剂、耗材 9
2.1.3试剂的配制 10
2.2.实验方法 10
2.2.1大肠杆菌β2163感受态的制备 10
2.2.2质粒pCjTKS2和大肠杆菌β2163感受态细胞的转化 10
2.2.3阳性重组子的鉴定和测序 11
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2.2.4转化后大肠杆菌β2163的培养 11
2.2.5大肠杆菌β2163菌株的适应性培养预实验 12
2.2.6钩端螺旋体的培养 12
2.2.7钩体突变株的构建 12
2.2.8钩体突变株的鉴定 12
3.实验结果 14
3.1大肠杆菌β2163菌株的培养结果 14
3.2大肠杆菌β2163阳性突变株的适应性培养预实验结果 14
3.3大肠杆菌β2163阳性突变株与钩体接和前的准备结果 15
3.4钩体突变株平板培养结果 16
3.5钩体突变株PCR扩增结果 17
4.讨论 18
致谢 18
参考文献 20
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