猪链球菌2型菌毛相关基因srtc2的克隆表达及免疫原性分析
猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是一种重要的人兽共患病原，可引起人和猪的感染，甚至死亡。为了进一步了解SS2的感染致病机制，以猪链球菌2型强毒株ZY05719为研究对象，对强毒株特有的5个菌毛相关基因之一的srt C2进行了克隆表达和产物免疫原性分析。PCR方法扩增出srt C2基因后，定向克隆到表达载体pET-32a中，并转化入DH5α中，提取重组质粒再转化入BL21中并IPTG诱导表达。诱导产物通过SDS-PAGE检测，约50KD处出现与预期相一致的蛋白条带。Western-blot分析发现，该蛋白可以被SS2高免血清所识别，具有良好的免疫原性。本实验为进一步研究菌毛相关蛋白Sortase C的致病作用及相关疫苗的制备奠定了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 猪链球菌菌株2
1.1.2 质粒及感受态细胞2
1.1.3 引物2
1.1.4 表达载体构建相关试剂2
1.1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）试剂2
1.1.6 蛋白质纯化试剂2
1.1.7 Westernblot试剂及抗体2
1.1.8 主要仪器2
1.2 方法 3
1.2.1 srt C2基因的PCR扩增3
1.2.2 pET srt C2重组表达载体的构建3
1.2.3 BL21中srt C2诱导表达 5
1.2.4 BL21中srt C2表达蛋白的纯化 5
1.2.5 Westernblot6
2 结果与分析7
2.1 srt C2基因的PCR扩增结果7
2.2 pETsrt C2重组质粒的PCR鉴定7
2.3 pETsrt C2重组质粒的双酶切鉴定8
2.4 pETsrt C2重组质粒的测序鉴定8
2.5 BL21 srt C2重组蛋白表达结果8
2.6 B *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
L21 srt C2重组蛋白纯化结果 9
2.7 Westernblot结果 10
3 讨论10 3.1 本实验的研究意义10 3.2 本实验的创新之处11 3.2.1 质粒提取条件的创新11 3.2.2 目的基因片段与表达载体pET32a连接的创新11 3.2.3 蛋白复性的优化11
3.3 本实验不足之处11
3.3.1 蛋白纯化中的不足11
3.3.2 Westernblot的不足11
致谢11
参考文献12 猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2
的克隆表达及免疫原性分析
引言
优良（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0）
二、观察、收集、整理、查阅资料及运用数据的水平
优良（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、学生的独立工作能力和动手能力
优良（20—16分）
一般（15—11分）
较差（10—0分）
四、毕业论文写作的规范化程度
优良（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0分）
五、毕业论文（设计）总体评价
优良（20—16分）
一般（15—6分）
较差（5—0分）
评定意见、成绩及能否提交答辩：
本科生毕业论文（设计）成绩评阅表
学院
动物医学院
动物医学
姓名
钱芸芸
论文题目
猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2的克隆表达及免疫原性分析
一、论文选题的价值与合理性
优秀（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0）
二、论文的难度、工作量大小和创新性
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、数据资料分析、归纳、概括及运算的能力
优秀（20—16分）
一般（15—11分）
较差（10—0分）
四、文字表达水平、文章的逻辑性
优秀（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0分）
五、论文写作的规范化程度
优秀（20—16分）
一般（15—6分）
较差（5—0分）
评阅意见、成绩及能否提交答辩：
本科生毕业论文（设计）答辩及综合评分表
（由答辩小组填写）
学院
动物医学院
动物医学
姓名
钱芸芸
论文题目
猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2的克隆表达及免疫原性分析
一、内容的科学性、应用性和创新性
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0）
二、论文写作水平及知识面掌握程度
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、语言表达能力、逻辑思维能力、回答问题的正确性
优秀（40—31分）
一般（30—11分）
较差（10—0分）
论文答辩成绩：
答辩小组负责人（签名）： 年 月 日
本科生毕业论文（设计）综合评定成绩
（由答辩委员会填写）
毕业论文（设计）评阅成绩30%
毕业论文（设计）答辩成绩40%
综合评定成绩
注：综合评定成绩等级：优秀（90100），良好（8089），中等（7079），及格（6069），不及格（60分以下）。
答辩委员会负责人（签名）： 年 月 日
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 猪链球菌菌株2
1.1.2 质粒及感受态细胞2
1.1.3 引物2
1.1.4 表达载体构建相关试剂2
1.1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）试剂2
1.1.6 蛋白质纯化试剂2
1.1.7 Westernblot试剂及抗体2
1.1.8 主要仪器2
1.2 方法 3
1.2.1 srt C2基因的PCR扩增3
1.2.2 pET srt C2重组表达载体的构建3
1.2.3 BL21中srt C2诱导表达 5
1.2.4 BL21中srt C2表达蛋白的纯化 5
1.2.5 Westernblot6
2 结果与分析7
2.1 srt C2基因的PCR扩增结果7
2.2 pETsrt C2重组质粒的PCR鉴定7
2.3 pETsrt C2重组质粒的双酶切鉴定8
2.4 pETsrt C2重组质粒的测序鉴定8
2.5 BL21 srt C2重组蛋白表达结果8
2.6 B *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
L21 srt C2重组蛋白纯化结果 9
2.7 Westernblot结果 10
3 讨论10 3.1 本实验的研究意义10 3.2 本实验的创新之处11 3.2.1 质粒提取条件的创新11 3.2.2 目的基因片段与表达载体pET32a连接的创新11 3.2.3 蛋白复性的优化11
3.3 本实验不足之处11
3.3.1 蛋白纯化中的不足11
3.3.2 Westernblot的不足11
致谢11
参考文献12 猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2
的克隆表达及免疫原性分析
引言
优良（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0）
二、观察、收集、整理、查阅资料及运用数据的水平
优良（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、学生的独立工作能力和动手能力
优良（20—16分）
一般（15—11分）
较差（10—0分）
四、毕业论文写作的规范化程度
优良（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0分）
五、毕业论文（设计）总体评价
优良（20—16分）
一般（15—6分）
较差（5—0分）
评定意见、成绩及能否提交答辩：
本科生毕业论文（设计）成绩评阅表
学院
动物医学院
动物医学
姓名
钱芸芸
论文题目
猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2的克隆表达及免疫原性分析
一、论文选题的价值与合理性
优秀（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0）
二、论文的难度、工作量大小和创新性
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、数据资料分析、归纳、概括及运算的能力
优秀（20—16分）
一般（15—11分）
较差（10—0分）
四、文字表达水平、文章的逻辑性
优秀（15—11分）
一般（10—6分）
较差（5—0分）
五、论文写作的规范化程度
优秀（20—16分）
一般（15—6分）
较差（5—0分）
评阅意见、成绩及能否提交答辩：
本科生毕业论文（设计）答辩及综合评分表
（由答辩小组填写）
学院
动物医学院
动物医学
姓名
钱芸芸
论文题目
猪链球菌2型菌毛相关基因srt C2的克隆表达及免疫原性分析
一、内容的科学性、应用性和创新性
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0）
二、论文写作水平及知识面掌握程度
优秀（30—21分）
一般（20—11分）
较差（10—0分）
三、语言表达能力、逻辑思维能力、回答问题的正确性
优秀（40—31分）
一般（30—11分）
较差（10—0分）
论文答辩成绩：
答辩小组负责人（签名）： 年 月 日
本科生毕业论文（设计）综合评定成绩
（由答辩委员会填写）
毕业论文（设计）评阅成绩30%
毕业论文（设计）答辩成绩40%
综合评定成绩
注：综合评定成绩等级：优秀（90100），良好（8089），中等（7079），及格（6069），不及格（60分以下）。
答辩委员会负责人（签名）： 年 月 日
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