姜黄素对小鼠肝脏脂代谢影响的研究
目的:观察姜黄素对小鼠生长、脂质代谢及肝脏肥胖基因（fat mass and obesity associated，FTO）和脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4，FABP4)mRNA表达量的影响。方法将24只小鼠分别用普通饲料、普通饲料+100 mg/kg姜黄素和普通饲料+200 mg/kg姜黄素饲喂3周。观察姜黄素对肝脏和血清脂质代谢指标的影响，采用实时荧光定量PCR检测肝脏FTO及FABP4的表达。结果添加不同浓度姜黄素对小鼠体重的影响差异不显著（P>0.05）；添加200 mg/kg姜黄素显著增加了肝脏高密度脂蛋白含量（P<0.05）；添加不同浓度姜黄素可降低血清中甘油三酯，提高高密度脂蛋白含量，但差异均不显著（P>0.05）；添加200 mg/kg姜黄素可降低FTO、FABP4基因在肝脏中的表达量，但差异不显著（P>0.05）。结论:姜黄素通过调控脂代谢相关基因的表达，来调节肝脏及血清中的生化指标，进而起到降脂的功效。
目录
摘要.1
关键词.1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料2
1.1.1试验动物2
1.1.2动物饲养管理2
1.1.3样品采集2
1.1.4试剂2
1.2方法2
1.2.1脂质代谢指标测定2
1.2.2FTO、FABP4基因表达测定3
1.2.3数据处理3
2结果与分析.3
2.1姜黄素对小鼠体的影响3
2.2姜黄素对小鼠脂质代谢指标的影响5
2.3姜黄素对小鼠FTO和FABP4基因表达的影响5
3讨论7
致谢8
参考文献8
姜黄素对小鼠肝脏脂代谢的调控机制研究
动物科学 余嘉瑶
引言
随着社会的进步与发展，生活质量的改善，人们消费肉类食品不断增加，摄入的脂肪也有所增多。随之所产生的脂代谢疾病发病率，如糖尿病、肥胖、高血脂等发病率也有所增加。姜黄是姜科多年生草本植物，其成分姜黄素主要 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
分布在姜黄的块茎中，含量在3%6%。研究表明，姜黄素的主要功效为抗炎症、抗肿瘤、抗氧化、降脂等作用。据相关研究表明，炎症可引起许多的慢性疾病，如哮喘、支气管炎、过敏、炎症性肠道疾病等。姜黄素作为天然的添加剂因其价格低廉、副作用小以及广泛的药理性而备受关注。据研究发现，姜黄素可以降低动物血脂水平，同时可以提高胰岛素的敏感性[1],改善糖尿病动物对胰岛素的抵抗。宋利娜[2]研究表明，姜黄素干预能明显降低糖尿病小鼠血糖及血清胰岛素水平。秦培洁[3]发现，姜黄素可以缓解2型糖尿病大鼠脂肪肝，降低PTP1B、IRS1mRNA表达及蛋白表达，增强IRS2mRNA表达。姜黄素通过抑制内酯素mRNA表达和增强联脂素mRNA的表达控制脂肪细胞的增殖。同时，姜黄素能够增加脂肪细胞对葡萄糖的摄取和利用，并促进脂肪分化。姜黄素通过对肝脏脂代谢相关基因和脂肪细胞的调控控制脂代谢过程。本次试验以饲养健康的812周的小鼠，并饲喂普通日粮和不同姜黄素浓度的日粮，饲养3周后解剖取样，测定相关代谢指标及相关基因的表达来探究姜黄素对小鼠肝脏脂质代谢的影响。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 试验动物
本次试验选取24只812周龄健康昆明小鼠分为3组，每组4只分笼饲养。
1．1．2 动物饲养管理
将3组小鼠放置于12h光照12h黑暗的鼠房，保证充足的饮水及干燥的鼠笼环境，并分别饲喂普通日粮、100mg/kg姜黄素日粮和200mg/kg姜黄素日粮。小鼠饲养3周，记录0、1、2、3周体重。
1．1．3 样品采集
小鼠取样前空腹12h（可饮水）。小鼠采用眼球取血法采集血液，采血后颈脱臼法死亡。解剖取肝脏、肠道粘膜（空肠和回肠）。
1．1．4 试剂
姜黄素购于Sigma公司。总胆固醇测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型）、甘油三酯测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型）、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（PTAMg2+沉淀法）购于南京建成生物工程研究所。反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购于TKARA公司。
1．2 方法
1．2．1 脂质代谢指标测定
本次实验采用建成公司的试剂盒测定小鼠血清甘油三酯、高密度脂蛋白和肝脏中的高密度脂蛋白含量。
1．2．1．1 甘油三酯含量测定
使用甘油三酯测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型），根据说明书进行操作。
表1 甘油三酯测定步骤
加入物
空白管
（B）
标准管
（S）
测定管
（T）
待测样品（μl）
3
标准品（μl）
3
试 剂（μl）
300
300
300
混匀，置37℃水浴5分钟，以空白管较零，
在546nm波长下比色读取各管吸光度值。
注：甘油三酯含量（mmol/L）=AT/AS*CS。
AT：测定管吸光度；AS：标准管吸光度；CS：标准浓度（CS=2.26 mmol/L）。
1．2．1．2 高密度脂蛋白含量测定
使用高密度脂蛋白测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型），根据说明书进行操作。
表2 高密度脂蛋白测定步骤
加入物
空白管
（B）
标准管
（S）
测定管
（T）
待测样品（μl）
200
标准品（μl）
200
沉淀剂（μl）
200
200
混匀，置室温10分钟，再以3000转/分钟离心15分钟，吸取上清
上清液（μl）
50
50
试 剂（μl）
1500
1500
1500
混匀，置37℃水浴510分钟，以空白管较零，在546nm/660nm波长下比色读取各管吸光度值。
注：甘油三酯含量（mmol/L）=AT/AS*CS。
AT：测定管吸光度；AS：标准管吸光度；CS：标准浓度（CS=1.29 mmol/L）。
1．2．2 FTO、FABP4基因表达测定
（1）RNA提取
取0.10.2g肝脏或肠黏膜于1.5ml离心管中，加入1ml Trizol试剂，将离心管放置在冰浴条件下匀浆，将离心管置于室温下静置5min。静置后，当离心机冷却至4℃时，将离心管放入离心机中以12000g的速度离心5min后，取上清液转移至1ml离心管中。向离心管中加入200μl氯仿，用振荡器振荡混匀1min后，在室温下静置5min。静置后，将离心管放入离心机中以12000g的速度离心15min，取300μl上清液转移至1ml离心管中，加入300μl异丙醇，放置在室温下静置10min。静置后，将离心机调至12000g的速度离心10min，倒去上清液，加入1ml75%乙醇，将离心管底部的沉淀物在乙醇中重复晃动，放入离心机7500g离心5min，重复两次清洗沉淀。弃上清液，保留沉淀，放置在超净台中自然干燥。向沉淀中加入适量的DEPC水溶解沉淀。测定RNA浓度。
目录
摘要.1
关键词.1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料2
1.1.1试验动物2
1.1.2动物饲养管理2
1.1.3样品采集2
1.1.4试剂2
1.2方法2
1.2.1脂质代谢指标测定2
1.2.2FTO、FABP4基因表达测定3
1.2.3数据处理3
2结果与分析.3
2.1姜黄素对小鼠体的影响3
2.2姜黄素对小鼠脂质代谢指标的影响5
2.3姜黄素对小鼠FTO和FABP4基因表达的影响5
3讨论7
致谢8
参考文献8
姜黄素对小鼠肝脏脂代谢的调控机制研究
动物科学 余嘉瑶
引言
随着社会的进步与发展，生活质量的改善，人们消费肉类食品不断增加，摄入的脂肪也有所增多。随之所产生的脂代谢疾病发病率，如糖尿病、肥胖、高血脂等发病率也有所增加。姜黄是姜科多年生草本植物，其成分姜黄素主要 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
分布在姜黄的块茎中，含量在3%6%。研究表明，姜黄素的主要功效为抗炎症、抗肿瘤、抗氧化、降脂等作用。据相关研究表明，炎症可引起许多的慢性疾病，如哮喘、支气管炎、过敏、炎症性肠道疾病等。姜黄素作为天然的添加剂因其价格低廉、副作用小以及广泛的药理性而备受关注。据研究发现，姜黄素可以降低动物血脂水平，同时可以提高胰岛素的敏感性[1],改善糖尿病动物对胰岛素的抵抗。宋利娜[2]研究表明，姜黄素干预能明显降低糖尿病小鼠血糖及血清胰岛素水平。秦培洁[3]发现，姜黄素可以缓解2型糖尿病大鼠脂肪肝，降低PTP1B、IRS1mRNA表达及蛋白表达，增强IRS2mRNA表达。姜黄素通过抑制内酯素mRNA表达和增强联脂素mRNA的表达控制脂肪细胞的增殖。同时，姜黄素能够增加脂肪细胞对葡萄糖的摄取和利用，并促进脂肪分化。姜黄素通过对肝脏脂代谢相关基因和脂肪细胞的调控控制脂代谢过程。本次试验以饲养健康的812周的小鼠，并饲喂普通日粮和不同姜黄素浓度的日粮，饲养3周后解剖取样，测定相关代谢指标及相关基因的表达来探究姜黄素对小鼠肝脏脂质代谢的影响。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 试验动物
本次试验选取24只812周龄健康昆明小鼠分为3组，每组4只分笼饲养。
1．1．2 动物饲养管理
将3组小鼠放置于12h光照12h黑暗的鼠房，保证充足的饮水及干燥的鼠笼环境，并分别饲喂普通日粮、100mg/kg姜黄素日粮和200mg/kg姜黄素日粮。小鼠饲养3周，记录0、1、2、3周体重。
1．1．3 样品采集
小鼠取样前空腹12h（可饮水）。小鼠采用眼球取血法采集血液，采血后颈脱臼法死亡。解剖取肝脏、肠道粘膜（空肠和回肠）。
1．1．4 试剂
姜黄素购于Sigma公司。总胆固醇测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型）、甘油三酯测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型）、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（PTAMg2+沉淀法）购于南京建成生物工程研究所。反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购于TKARA公司。
1．2 方法
1．2．1 脂质代谢指标测定
本次实验采用建成公司的试剂盒测定小鼠血清甘油三酯、高密度脂蛋白和肝脏中的高密度脂蛋白含量。
1．2．1．1 甘油三酯含量测定
使用甘油三酯测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型），根据说明书进行操作。
表1 甘油三酯测定步骤
加入物
空白管
（B）
标准管
（S）
测定管
（T）
待测样品（μl）
3
标准品（μl）
3
试 剂（μl）
300
300
300
混匀，置37℃水浴5分钟，以空白管较零，
在546nm波长下比色读取各管吸光度值。
注：甘油三酯含量（mmol/L）=AT/AS*CS。
AT：测定管吸光度；AS：标准管吸光度；CS：标准浓度（CS=2.26 mmol/L）。
1．2．1．2 高密度脂蛋白含量测定
使用高密度脂蛋白测定试剂盒（酶偶联比色法/单试剂型），根据说明书进行操作。
表2 高密度脂蛋白测定步骤
加入物
空白管
（B）
标准管
（S）
测定管
（T）
待测样品（μl）
200
标准品（μl）
200
沉淀剂（μl）
200
200
混匀，置室温10分钟，再以3000转/分钟离心15分钟，吸取上清
上清液（μl）
50
50
试 剂（μl）
1500
1500
1500
混匀，置37℃水浴510分钟，以空白管较零，在546nm/660nm波长下比色读取各管吸光度值。
注：甘油三酯含量（mmol/L）=AT/AS*CS。
AT：测定管吸光度；AS：标准管吸光度；CS：标准浓度（CS=1.29 mmol/L）。
1．2．2 FTO、FABP4基因表达测定
（1）RNA提取
取0.10.2g肝脏或肠黏膜于1.5ml离心管中，加入1ml Trizol试剂，将离心管放置在冰浴条件下匀浆，将离心管置于室温下静置5min。静置后，当离心机冷却至4℃时，将离心管放入离心机中以12000g的速度离心5min后，取上清液转移至1ml离心管中。向离心管中加入200μl氯仿，用振荡器振荡混匀1min后，在室温下静置5min。静置后，将离心管放入离心机中以12000g的速度离心15min，取300μl上清液转移至1ml离心管中，加入300μl异丙醇，放置在室温下静置10min。静置后，将离心机调至12000g的速度离心10min，倒去上清液，加入1ml75%乙醇，将离心管底部的沉淀物在乙醇中重复晃动，放入离心机7500g离心5min，重复两次清洗沉淀。弃上清液，保留沉淀，放置在超净台中自然干燥。向沉淀中加入适量的DEPC水溶解沉淀。测定RNA浓度。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/651.html
