不同处死方式对c57bl6j小鼠超排卵子质量的影响
【目的】本实验以4周龄的C57BL/6J雌鼠为研究对象，采用不同的处死方式采集C57BL/6J雌鼠卵子并进行体外受精和胚胎移植实验，通过比较超排卵子数、卵子存活率、受精率和生仔率来判断不同处死方式对该品系小鼠超排卵子的质量的影响，为全面保障动物福利和提高实验效率提供科学依据。【方法】本实验分别采用脱颈椎(实验组A)、麻醉（实验组B）和二氧化碳窒息（实验组C）三种不同的方式处死经超排过的小鼠的卵子，将各组取得的卵子经体外受精后移植胚胎到假孕母鼠体内，获得后代仔鼠。【结果】实验结果显示，三种方式得到的卵子中，实验组A的小鼠卵子存活数，体外受精率和移植生仔率远高于实验组B和C；实验组B的受精率和生仔率低于实验组C。【结论】本研究表明麻醉处死对C57BL/6J雌鼠卵子质量的影响最大，CO2处死次之，脱颈椎处死影响最小。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 实验动物 2
1.1.2 主要材料和仪器 2
1.1.3 主要试剂 2
1.2方法 2
1.2.1雌鼠雄鼠准备 3
1.2.2卵子和精子的采集 3
1.2.3假孕母鼠检栓 5
1.2.4 体外受精（IVF） 5
1.2.5受体雌鼠的胚胎移植5
2 结果与分析6
2.1不同处死方式对超排效果的影响6
2.2不同处死方式对卵子存活的影响 6
2.3不同处死方式对体外受精率的影响7
2.4不同处死方式对移植生仔率的影响7
3 讨论 8
致谢9
参考文献9
不同处死方式对C57BL/6J小鼠体外受精 及胚胎移植的影响
引言
小鼠因其体形小、生命周期短、繁殖力强、产仔多、个体差异小、饲养管理方便、遗传基因组及组织解剖结构与人类相似等优点，成为当今世界科学研究领域方面研究最详尽、用量最大、用途最广、品种与品系最多的一种实验动物。实验小鼠广泛 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
应用于化妆品试验、生物医药研究。其中C57BL/6J品系小鼠因遗传背景稳定详细，繁育方式容易操作，成为近年来，尤其是基因工程上应用最广泛的一种近交系小鼠。
从实验动物福利正式出现在科学领域中起，世界各国就实验动物福利分别制定了明确的法律条款，人们不再将实验动物作为单纯的实验材料，而是肯定其对科学实验的献身价值。人们发现实验动物福利不仅体现了人们对实验动物的关爱，更是直接影响科学研究结果。随着实验动物生产的量化和规模化，国内外许多实验动物设施更是把实验动物福利作为设施考核的标准之一，即AAALAC认证规则。在AAALAC认证规则中，从实验动物的饲养到生产繁殖都做了明确规定，其中就有要求处死实验动物前需对其进行麻醉处理或者采用二氧化碳窒息的方式以减轻痛苦。针对这两种处死方式，本实验以C57BL/6J小鼠作为研究对象，设计通过比较不同处死方式的C57BL/6J雌鼠的超排卵子数、体外受精和胚胎移植实验的结果，判断不同的处死方式对雌鼠卵子质量的影响，为确保实验动物福利并保障实验的效率提供科学依据，全面提高该品系小鼠体外受精率，为C57BL/6J小鼠的资源保存奠定基础。目前国内外尚未有相关研究，期望本次实验能为实验小鼠的福利提供一定的科学依据。
材料与方法
本实验将4周龄的C57BL/6J雌鼠随机分为3组，即实验组A（脱颈椎处死）、实验组B（麻醉处死）和实验组C（二氧化碳窒息处死），每组5只。
1.1 材料
1.1.1 实验动物
SPF级实验C57BL/6J雌鼠，3.54周龄，由南京大学模式动物研究所提供，动物生产许可证号：SCXK（苏）20100001。饲养在SPF级动物实验室，室温2025℃，湿度40%70%。饲料为Co60辐照灭菌，饮用高压灭菌水。实验动物使用许可证号：SYXK（苏）20100003。
1.1.2 主要材料和仪器
超净工作台、体式显微镜、CO2培养箱（Forma 3111）、热台、一次性手术单、纱布、有钩镊子、剪毛剪、眼科剪、止血镊、持针钳、1 ml一次性注射器若干、毛细管吸管、培养皿若干。
1.1.3 主要试剂
孕马血清素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin , PMSG）宁波市三生药业有限公司、人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin , HCG）宁波市三生药业有限公司、DPBS (Gibco 21600010)、麻醉剂Avertin（SigmaAldrich T48402100g）、HTF和TFS（自配）、M2（sigma M7167）、M16（sigma M7292）、矿物油
1.2 方法
本次实验将15只雌鼠随机均分为3组，实验组A（脱颈椎处死）、实验组B（Avertin麻醉剂腹腔注射处死）和实验组C（二氧化碳窒息处死）各5只小鼠进行同步对比实验。实验流程如图1。
雄鼠雌鼠准备
供体雌鼠超速排卵（超排）
——→
雄鼠试配单放一周
↓
采集精子和卵子，分别置于37℃培养滴中培养30min
↓
体外受精（IVF）
↓培育24h
显微观察受精卵数，并记录
↓
胚胎移植
↓
2周后观察移植受体怀孕情况。21天后观察小鼠出生情况，记录生仔数
图 1 实验流程
Chart 1 Experimental Process
1.2.1 雌鼠雄鼠准备
供体雌鼠超排：选用15只3.54周龄C57BL/6J雌鼠（供体）进行腹腔注射，每5只饲养一笼。
第1天：下午5点注射PMSG（5IU/只）。
第3天：下午6点注射HCG（5IU/只）。
雄鼠试配单放：选用36月龄雄鼠2只，提前试配并单放饲养一周用于交配。
假孕母鼠的准备：在给供体雌鼠注射HCG的同一天下午4点左右，挑选6～8周龄、体格健壮的发情雌鼠与结扎雄鼠交配，12h后，即第4天上午同供体雌鼠一起检查，有阴道栓者为假孕母鼠，作为体外移植受体鼠备用。
1.2.2 卵子和精子的采集
卵子采集：第4天上午9时左右分别对3组雌鼠采用不同方式处死（脱颈椎处死，麻醉处死，CO2处死，注意麻醉剂的注射剂量根据雌鼠体重不同而不同，一般标准为0.250.3ml/2030g，3.54周龄雌鼠一般注射0.15ml左右即可。）后半分钟内剪取输卵管膨大部于事先准备好盛有矿物油的实验培养皿中，置于显微镜下观察，选出有透明空泡状的膨大部，用眼科镊轻轻翻找膨大部中含有卵细胞和颗粒细胞的复合液，取出卵子（如图3），置于事先培养好的HTF培养滴中37℃孵育30min。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 实验动物 2
1.1.2 主要材料和仪器 2
1.1.3 主要试剂 2
1.2方法 2
1.2.1雌鼠雄鼠准备 3
1.2.2卵子和精子的采集 3
1.2.3假孕母鼠检栓 5
1.2.4 体外受精（IVF） 5
1.2.5受体雌鼠的胚胎移植5
2 结果与分析6
2.1不同处死方式对超排效果的影响6
2.2不同处死方式对卵子存活的影响 6
2.3不同处死方式对体外受精率的影响7
2.4不同处死方式对移植生仔率的影响7
3 讨论 8
致谢9
参考文献9
不同处死方式对C57BL/6J小鼠体外受精 及胚胎移植的影响
引言
小鼠因其体形小、生命周期短、繁殖力强、产仔多、个体差异小、饲养管理方便、遗传基因组及组织解剖结构与人类相似等优点，成为当今世界科学研究领域方面研究最详尽、用量最大、用途最广、品种与品系最多的一种实验动物。实验小鼠广泛 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
应用于化妆品试验、生物医药研究。其中C57BL/6J品系小鼠因遗传背景稳定详细，繁育方式容易操作，成为近年来，尤其是基因工程上应用最广泛的一种近交系小鼠。
从实验动物福利正式出现在科学领域中起，世界各国就实验动物福利分别制定了明确的法律条款，人们不再将实验动物作为单纯的实验材料，而是肯定其对科学实验的献身价值。人们发现实验动物福利不仅体现了人们对实验动物的关爱，更是直接影响科学研究结果。随着实验动物生产的量化和规模化，国内外许多实验动物设施更是把实验动物福利作为设施考核的标准之一，即AAALAC认证规则。在AAALAC认证规则中，从实验动物的饲养到生产繁殖都做了明确规定，其中就有要求处死实验动物前需对其进行麻醉处理或者采用二氧化碳窒息的方式以减轻痛苦。针对这两种处死方式，本实验以C57BL/6J小鼠作为研究对象，设计通过比较不同处死方式的C57BL/6J雌鼠的超排卵子数、体外受精和胚胎移植实验的结果，判断不同的处死方式对雌鼠卵子质量的影响，为确保实验动物福利并保障实验的效率提供科学依据，全面提高该品系小鼠体外受精率，为C57BL/6J小鼠的资源保存奠定基础。目前国内外尚未有相关研究，期望本次实验能为实验小鼠的福利提供一定的科学依据。
材料与方法
本实验将4周龄的C57BL/6J雌鼠随机分为3组，即实验组A（脱颈椎处死）、实验组B（麻醉处死）和实验组C（二氧化碳窒息处死），每组5只。
1.1 材料
1.1.1 实验动物
SPF级实验C57BL/6J雌鼠，3.54周龄，由南京大学模式动物研究所提供，动物生产许可证号：SCXK（苏）20100001。饲养在SPF级动物实验室，室温2025℃，湿度40%70%。饲料为Co60辐照灭菌，饮用高压灭菌水。实验动物使用许可证号：SYXK（苏）20100003。
1.1.2 主要材料和仪器
超净工作台、体式显微镜、CO2培养箱（Forma 3111）、热台、一次性手术单、纱布、有钩镊子、剪毛剪、眼科剪、止血镊、持针钳、1 ml一次性注射器若干、毛细管吸管、培养皿若干。
1.1.3 主要试剂
孕马血清素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin , PMSG）宁波市三生药业有限公司、人绒毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin , HCG）宁波市三生药业有限公司、DPBS (Gibco 21600010)、麻醉剂Avertin（SigmaAldrich T48402100g）、HTF和TFS（自配）、M2（sigma M7167）、M16（sigma M7292）、矿物油
1.2 方法
本次实验将15只雌鼠随机均分为3组，实验组A（脱颈椎处死）、实验组B（Avertin麻醉剂腹腔注射处死）和实验组C（二氧化碳窒息处死）各5只小鼠进行同步对比实验。实验流程如图1。
雄鼠雌鼠准备
供体雌鼠超速排卵（超排）
——→
雄鼠试配单放一周
↓
采集精子和卵子，分别置于37℃培养滴中培养30min
↓
体外受精（IVF）
↓培育24h
显微观察受精卵数，并记录
↓
胚胎移植
↓
2周后观察移植受体怀孕情况。21天后观察小鼠出生情况，记录生仔数
图 1 实验流程
Chart 1 Experimental Process
1.2.1 雌鼠雄鼠准备
供体雌鼠超排：选用15只3.54周龄C57BL/6J雌鼠（供体）进行腹腔注射，每5只饲养一笼。
第1天：下午5点注射PMSG（5IU/只）。
第3天：下午6点注射HCG（5IU/只）。
雄鼠试配单放：选用36月龄雄鼠2只，提前试配并单放饲养一周用于交配。
假孕母鼠的准备：在给供体雌鼠注射HCG的同一天下午4点左右，挑选6～8周龄、体格健壮的发情雌鼠与结扎雄鼠交配，12h后，即第4天上午同供体雌鼠一起检查，有阴道栓者为假孕母鼠，作为体外移植受体鼠备用。
1.2.2 卵子和精子的采集
卵子采集：第4天上午9时左右分别对3组雌鼠采用不同方式处死（脱颈椎处死，麻醉处死，CO2处死，注意麻醉剂的注射剂量根据雌鼠体重不同而不同，一般标准为0.250.3ml/2030g，3.54周龄雌鼠一般注射0.15ml左右即可。）后半分钟内剪取输卵管膨大部于事先准备好盛有矿物油的实验培养皿中，置于显微镜下观察，选出有透明空泡状的膨大部，用眼科镊轻轻翻找膨大部中含有卵细胞和颗粒细胞的复合液，取出卵子（如图3），置于事先培养好的HTF培养滴中37℃孵育30min。
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